이 비디오에서 우리는 미국 말굽 꽃게와 electroretinogram 녹음, 시신경 녹음 및 intraretinal 녹음을 수행 Limulus Polyphemus. 이러한 electrophysiological 패러다임은 연구 또는 교육 실습실에서 비전의 신경 기초를 조사 사용할 수 있습니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
미국 말굽 게, Limulus Polyphemus이 지구상에서 가장 오래된 생물 중 하나이며, 동물은 생명 의학 연구에 필수적인 역할을하고 있습니다. 뿐만 아니라 그들의 혈액은 과학자들이 우리의 의약품에 bacteriotoxins을 감지하기 위해 사용하는 특별한 세포를 포함하고 있지만, 그들의 눈을 또한 가벼운 적응 및 측면 억제와 같은 우리의 시각 시스템에서 운영 생리적 과정에 대한 많은 통찰력을 제공하고 있습니다 신경 네트워크를 포함 않습니다. 말굽 게이 동물이 대형 무척추 동물에 대한 하디이기 때문에, 그 망막 뉴런이 크고 쉽게 액세스할 수있는 비전 연구를위한 매력적인 모델 남아의 시각 시스템은 콤팩트하고 광범위하게 공부하고, 그 시각적 동작이 잘 정의됩니다. 또한, 내 눈을의 구조와 기능은 동물의 두뇌에 circadian 시계에 의해 매일 변조된 수 있습니다. 요컨대, 말굽 모양의 게를의 시각 시스템은 아직 흥미있을 정도로 복잡한 이해 정도로 간단하다.
이 비디오에서 우리는 Limulus와 생체내으로 수행할 수 있습니다 비전의 신경 기초를 조사 세 electrophysiological 패러다임을 제시한다. 그들은 electroretinogram 녹음, 시신경 녹음 및 녹화 intraretinal 있습니다. 표면 Electroretinogram (에르그) 레코딩 측정은 빛의 섬광에 눈의 모든 세포의 표현 전기 응답을 전극. 그들은 시간의 연장 기간 동안 안구의 전반적인 감도를 모니터링하는 데 사용할 수 있습니다. 시신경 레코딩은 세포 microsuction 전극과 하나의 신경 섬유의 급상승 활동을 측정합니다. 그들은 눈의 두뇌뿐 아니라 두뇌에서 눈에 다시 먹이 circadian - 시계 메시지 전달 시각적 메시지를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 세포내 microelectrode과 Intraretinal 레코딩 측정은 전압 변동은 눈의 개별 세포에 의해 빛을 유도. 그들은 망막 세포 처리 메커니즘을 명료하게하다하는 데 사용할 수 있습니다.
프로토콜
1 부 : 실험 준비
말굽 게는에서 수행 실험 절차는 보스턴 대학에서 기관 애니멀 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 동물은 규제 빛을 어둠 사이클에 노출 방에있는 해양 생물 연구소 (우즈 홀, MA) 또는 다른 공급 업체로부터 구입하여 aerated 바닷물 탱크에 보관되어있다. 조명 처방은 꽃게의 circadian 시계를 entraining와 주간과 야간 상태 사이에 매일 눈을 사이클링에 중요합니다. 그 운동이 두 스테인레스 스틸 prosoma에 삽입된 나사와 opisthosoma 두와 느려짐 다음 나무 플랫폼 보안 때까지 즉시 침략 절차를 시작하기 전에, 동물은 10-15분위한 얼음 양동이에 차게됩니다. 그것이 물에 싱크 있도록 플랫폼은 화강암 아래에 가중치입니다. 터미널 실험 후 동물 다시 아이스 슬러리에 immersing과 메스와 입 위의 자리 두뇌, pithing하여 euthanized있다.
2 부 : 솔루션
Limulus 링어의 솔루션은 430 MM NaCl, 9.56 MM KCl, 9.52 MM CaCl2, 9.97 MM MgCl2, 21.05 MM MgSO4, 50μM TES, 50μM HEPES, 그리고 10ml / L ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
우리는 에르그 녹음, 시신경 녹음 및 생체내의 말굽 게에 intraretinal 레코딩을 수행하는 방법을 보여주고있다. 녹음 기술 각각 비전의 신경 기초로 다른 통찰력을 제공하고, 그들은 모든 게의 눈은 크고 어려운 등딱지 사는 동물 감사 망막의 기능을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 시신경의 활동도 자유롭게 전극의 적절한 건설 (4) 바다에서 동물 행동에서 기록하실 수 있습니다. 이러한 기술은 또한 설정의 사소한 변경과 excised 눈에 수행할 수 있습니다. 자연 조건 이러한 실험의 관련은 꽃게의 안구 변화의 생리적 특성이 동물 (5)에서 제거 때, 제한 될,하지만 수업이 값은 이러한 방법의 광범위한 사용 주어진 교육 실험실에 대한 좋은 것입니다 신경 과학.
에르그 녹음, 시신경 녹음 및 intraretinal 녹음 명확히하기 위해 별도 여기를 제시했다. 실제로 여러 녹음 방식은 종종 동시에 신경 활동의 변화와 하나 또는 둘 모두 측면 눈에 시각적 감도를 모니터링하는 하.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
감사의 글
저자는이 비디오 기사를 생산 그녀 도움 박사 Birgit 베르너을 인정하고 싶습니다. 이 연구는 NSF 경력 수상에 의해 투자되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| LED | 광원 | Newark Inc | 33C1292 | |
| 흡입 전극 | 전극 | A-M Systems | 573000 | |
| XCell 3*4-채널 세포 외 증폭기 | 증폭기 | FHC, Inc. | 40-40-8B | |
| 세포 내 기록 장치 | 증폭기 | Cygnus | IR-283A | |
| APM | 신경 스파이크 판별기 | FHC, Inc. | APM | |
| Bits++ | 비디오 보드 | Cambridge Research Systems | Bits++ | |
| Piezopatch 조작기 | 마이크로포지셔너 | World Precision Instruments, Inc. | PPM5000 | |
| Square Pulse 자극기 | 신경 자극기 | Grass Technologies | Model S48 | |
| P-97 | 마이크로피펫 풀러 | Sutter Instrument Co. | Model P-97 | |
| 붕규산 유리 모세관 | 전극 유리 | World Precision Instruments, Inc. | 1B150-4 | |
| Horsesh–crab (Limulus polyphemus) | 동물 | Marine Biological Laboratories | ||
| 마이크로피펫 풀러 | 글라스 풀러 | Sutter Instrument Co. | P-97 | |
| Zoom 스테레오스코프 | 현미경 | Jed Pella Inc. | SMZ-168 |
참고문헌
- Barlow, R. B. Jr Circadian rhythms in the Limulus visual system. J. Neurosci. 3, 856-870 (1983).
- Passaglia, C. L., Dodge, F. A., Barlow, R. B. Cell based model of the Limulus lateral eye. J. Neurophysiol. 80, 1800-1815 (1998).
- Snodderly, D. M. Jr
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
