प्रतिदीप्ति बगल में संकरण (मछली) प्रोटोकॉल

Summary

यह वीडियो आलेख वर्णन करता है, कदम से कदम, कैसे एक वीर्य नमूना प्रक्रिया करने के लिए अच्छी गुणवत्ता वाले प्रतिदीप्ति प्राप्त करने<em> बगल में</emमानव शुक्राणु> संकरण. प्राप्त तैयारी aneuploidy स्क्रीनिंग के लिए नैदानिक ​​निदान के संदर्भ में इस्तेमाल किया जा सकता है.

Abstract

Aneuploidies मनुष्यों में सबसे अक्सर गुणसूत्र असामान्यताओं हैं. इन असामान्यताएं के अधिकांश माता पिता में gametogenic प्रक्रिया के दौरान meiotic त्रुटियों से परिणाम. मानव पुरुषों में, इन त्रुटियों को संख्यात्मक गुणसूत्र असामान्यताएं जो संतानों के लिए इन विसंगतियों का संचारण का एक बढ़ा जोखिम का प्रतिनिधित्व करते हैं के साथ शुक्राणु के उत्पादन के लिए नेतृत्व कर सकते हैं.

इस कारण से, शुक्राणु नाभिक पर स्वस्थानी संकरण (मछली) में प्रतिदीप्ति की तकनीक एक नैदानिक ​​निदान के संदर्भ में व्यापक रूप से शामिल प्रोटोकॉल बन गया है. इस अभ्यास के रोगियों है कि आनुवंशिक प्रजनन सलाह के लिए तलाश के gametes में संख्यात्मक गुणसूत्र असामान्यताओं की आवृत्तियों के एक अनुमान प्रदान करती है.

तिथि करने के लिए, सबसे अक्सर शुक्राणु मछली विश्लेषण में शामिल गुणसूत्रों गुणसूत्रों एक्स, वाई, 13, 18 और 21 हैं.

यह वीडियो आलेख वर्णन करता है, कदम से कदम, कैसे प्रक्रिया और एक मानव वीर्य नमूना ठीक है, कैसे decondense और शुक्राणु chromatin, कैसे करने के लिए शुक्राणु मछली की तैयारी को प्राप्त करने के लिए आगे बढ़ना denature, और माइक्रोस्कोप पर परिणामों की कल्पना कैसे. सबसे अधिक प्रासंगिक कदम की विशेष टिप्पणी के लिए सबसे अच्छा परिणाम प्राप्त करने के लिए दिया जाता है.

Protocol

मैं नमूना प्रसंस्करण और सेल निर्धारण द्रवीकरण जब तक 20 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर बाँझ कंटेनर में वीर्य का नमूना छोड़ो. एक अपकेंद्रित्र ट्यूब नमूना स्थानांतरण और 1000g पर यह 5 मिनट के लिए स्पिन. <…

Discussion

इस प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे शुक्राणु मछली तैयारी प्राप्त करने के लिए मानव वीर्य के नमूनों की प्रक्रिया है. इस प्रोटोकॉल का उपयोग करना यह संभव है कि पुरुष gametes में गुणसूत्र असामान्यताओं का विश्लेषण. शुक्?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
1,4-Dithiothreitol (DTT)	Material	Roche	10197777001
2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol	Material	Roche	10708976001
Acetic acid	Material	Merck	100.063
AneuVysion® Multicolor DNA Probe Kit 20xSaline-Sodium Citrate 4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI II) CEP 18/X/Y DNA probe NP-40 LSI 13/21 DNA probe	Material	Vysis Inc.	32-161075 30-805850 30-804941 30-171077 30-804820 30-171078
Centrifuge 5804R	Tool	Eppendorf
Centrifuge tube	Material	Nunc	347856
Coplin jar (glass)	Material	Barloworld Scientific	Hellendahl (ZCT278)
Coplin jar (plastic)	Material	Deltalab	191087
Cover slips (15×15)	Material	Knittel gläser	4600115
Cover slips (18×18)	Material	Knittel gläser	4600118
Diamond pencil	Material	Hammacher	335117010
Ethanol	Material	Merck	100.983
Formamide	Material	Roche	11814320001
Freezer	Tool	Zanussi
Gloves	Material	Sanyc	101/3300
HYBrite™	Tool	Vysis Inc.
Immersion Oil	Material	Olympus	35505
Incubator	Tool	Heraeus
Methanol	Material	Merck	106.009
Micropipette	Material	Labsystems	Finnpipette (4500000)
Micropipette replacement tip	Material	Daslab	16-2001
Nail varnish	Material	Quo-cosmetics
Olympus BX60 epifluorescence microscope	Tool	Olympus		Equipped with a triple-band filter for DAPI/Texas Red/FITC and single-band filters for Aqua, FITC and Texas Red.
Pasteur Pipette	Material	Rubilabor	211.0230
Phase contrast microscope	Tool	Nikon Diaphot
Plastic pipette (3ml)	Material	Deltalab	200007
Potassium chloride (KCl)	Material	Fluka	60128
Rubber cement	Material	Best-test
Slides	Material	Knittel gläser	4520022
Slide Saver Boxes	Material	Deltalab	19276.1
Sterile container	Material	Deltalab	409726
Syringe	Material	PentaFerte	002022300
Thermometer	Material	Comark Instruments, Inc	KM12
Tri-distilled water	Material
Triton X-100	Material	Sigma	9002-93-1
Tweezers	Material	B/Braun	Aesculap (BD224R)
Vertical laminar flow hood	Tool	Burdinola	OR-ST 1500
Vortex mixer	Tool	Fisher Scientific	FB15012
Water bath	Tool	Raypa®