Floresan In situ İnsan Sperm hibridizasyon (FISH) Protokolü
Summary
Bu video-makale, semen örneği nasıl işleneceğini, iyi kalite floresan elde etmek için adım adım açıklanmaktadır<em> In situ</em> Insan sperm hibridizasyon. Elde hazırlıklar bağlamında klinik tanı anöploidi tarama için kullanılabilir.
Abstract
Anöploidiler insanlarda en sık görülen kromozom anomalileri. Bu anormalliklerin çoğu anne gametogenic işlemi sırasında mayotik hataları sonucu. Insan erkek, bu hataları yavrular bu anomaliler bulaştırma riski temsil eden sayısal kromozom anomalileri ile sperm üretimine yol açabilir.
Bu nedenle, floresan in situ hibridizasyon (FISH) sperm çekirdekleri tekniği yaygın klinik tanı çerçevesinde kurulmuş bir protokol haline gelmiştir. Bu uygulama, frekansların sayısal kromozom anomalileri, genetik üreme tavsiye için arayan hastaların gamet bir tahmin sağlar.
Bugüne kadar, en sık sperm FISH analizi dahil kromozom kromozomlar X, Y, 13, 18 ve 21.
Bu video-makale, mikroskop sonuçları nasıl görselleştirmek için decondense ve nasıl elde etmek için sperm FISH preparatları devam etmek sperm kromatin, doğasını, nasıl bir insan semen örneği süreci ve düzeltmek için nasıl adım adım ve açıklar. En iyi sonuçları elde etmek için en uygun adımları özel açıklamalar verilmiştir.
Protocol
Discussion
Bu protokol, sperm FISH preparatları elde etmek için insan semen süreci anlatılmaktadır. Bu protokolü kullanmak, erkek gamet kromozom anormallikleri analiz etmek mümkündür. Spermatozoa anöploidi taraması kapsamında temel araştırma ve infertil erkeklere verilen üreme tavsiye veya uygulamalar vardır. Klinik tanısında en yaygın çalışılan kromozomları X, Y, 13, 18 ve 21, kromozomlar ve lokusların geniş bir yelpazede diğer ticari problar mevcuttur ve bu deneylerde de kullanılabilir olmasına rağm…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Generalitat de Catalunya (2005-SGR00437) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, onun teknik yardım için denetlemek ve teşvik edilmesi, ve J. Lucas J. Blanco ve F. Vidal için teşekkür ederiz.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1,4-Dithiothreitol (DTT) | Material | Roche | 10197777001 | |
| 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol | Material | Roche | 10708976001 | |
| Acetic acid | Material | Merck | 100.063 | |
AneuVysion® Multicolor DNA Probe Kit
|
Material | Vysis Inc. | 32-161075
|
|
| Centrifuge 5804R | Tool | Eppendorf | ||
| Centrifuge tube | Material | Nunc | 347856 | |
| Coplin jar (glass) | Material | Barloworld Scientific | Hellendahl (ZCT278) | |
| Coplin jar (plastic) | Material | Deltalab | 191087 | |
| Cover slips (15×15) | Material | Knittel gläser | 4600115 | |
| Cover slips (18×18) | Material | Knittel gläser | 4600118 | |
| Diamond pencil | Material | Hammacher | 335117010 | |
| Ethanol | Material | Merck | 100.983 | |
| Formamide | Material | Roche | 11814320001 | |
| Freezer | Tool | Zanussi | ||
| Gloves | Material | Sanyc | 101/3300 | |
| HYBrite™ | Tool | Vysis Inc. | ||
| Immersion Oil | Material | Olympus | 35505 | |
| Incubator | Tool | Heraeus | ||
| Methanol | Material | Merck | 106.009 | |
| Micropipette | Material | Labsystems | Finnpipette (4500000) | |
| Micropipette replacement tip | Material | Daslab | 16-2001 | |
| Nail varnish | Material | Quo-cosmetics | ||
| Olympus BX60 epifluorescence microscope | Tool | Olympus | Equipped with a triple-band filter for DAPI/Texas Red/FITC and single-band filters for Aqua, FITC and Texas Red. | |
| Pasteur Pipette | Material | Rubilabor | 211.0230 | |
| Phase contrast microscope | Tool | Nikon Diaphot | ||
| Plastic pipette (3ml) | Material | Deltalab | 200007 | |
| Potassium chloride (KCl) | Material | Fluka | 60128 | |
| Rubber cement | Material | Best-test | ||
| Slides | Material | Knittel gläser | 4520022 | |
| Slide Saver Boxes | Material | Deltalab | 19276.1 | |
| Sterile container | Material | Deltalab | 409726 | |
| Syringe | Material | PentaFerte | 002022300 | |
| Thermometer | Material | Comark Instruments, Inc | KM12 | |
| Tri-distilled water | Material | |||
| Triton X-100 | Material | Sigma | 9002-93-1 | |
| Tweezers | Material | B/Braun | Aesculap (BD224R) | |
| Vertical laminar flow hood | Tool | Burdinola | OR-ST 1500 | |
| Vortex mixer | Tool | Fisher Scientific | FB15012 | |
| Water bath | Tool | Raypa® |
References
- Blanco, J., Egozcue, J., Vidal, F. Incidence of chromosome 21 disomy in human spermatozoa as determined by fluorescent in-situ hybridization. Hum. Reprod. 11, 722-726 (1996).
