भ्रूणीय Zebrafish और सीडीएनए संश्लेषण से जीन एक्सप्रेशन विश्लेषण के लिए शाही सेना अलगाव
Summary
उच्च गुणवत्ता के अलगाव, शाही सेना बरकरार कई प्रयोगशाला प्रोटोकॉल में एक आवश्यक कदम है. यहाँ, हम पूरे zebrafish भ्रूण और बाद में जीन की अभिव्यक्ति माइक्रोएरे विश्लेषण सहित विभिन्न प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं में आवेदन के लिए सीडीएनए संश्लेषण से शाही सेना निकासी प्रदर्शित करता है.
Abstract
कई महत्वपूर्ण और जटिल प्रयोगशाला प्रक्रिया उच्च गुणवत्ता बरकरार शाही सेना के एक इनपुट की आवश्यकता है. एक अपमानित नमूना या अशुद्धियों की उपस्थिति बहाव प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों में विनाशकारी परिणाम के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. इसलिए यह अत्यंत महत्व के कई रक्षोपायों और गुणवत्ता नियंत्रण की जाँच के साथ ठोस तकनीक का उपयोग करने के लिए एक बेहतर नमूना सुनिश्चित है. इस के साथ साथ, हम विस्तार करने के लिए एक पूरे zebrafish भ्रूण से एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध रासायनिक denaturant और बाद में सफाई का उपयोग करने के लिए डीएनए और दोष एक वाणिज्यिक आरएनए अलगाव किट का उपयोग कर के निशान हटाने कुल शाही सेना को अलग प्रोटोकॉल. के रूप में शाही सेना अपेक्षाकृत अस्थिर है और आसानी से RNAses द्वारा दरार करने के लिए प्रवण है, सबसे प्रोटोकॉल परख जीन अभिव्यक्ति का उपयोग कर एक सीडीएनए उत्पाद है कि सीधे एक शाही सेना टेम्पलेट से संश्लेषित है. हम एक प्रक्रिया विस्तार आरएनए अधिक स्थिर सीडीएनए उत्पाद में एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध किट का उपयोग कर कन्वर्ट. इन प्रक्रियाओं के दौरान वहाँ कई गुणवत्ता नियंत्रण चेक करने के लिए सुनिश्चित करें कि नमूना अपमानित या दूषित नहीं है. इन प्रोटोकॉल के अंत उत्पाद सीडीएनए कि माइक्रोएरे विश्लेषण, RT-पीसीआर या लंबी अवधि के भंडारण के लिए उपयुक्त है.
Protocol
Discussion
शाही सेना अणु की कमजोरी सबसे महत्वपूर्ण विचार है कि इस प्रोटोकॉल भर में याद किया जाना चाहिए है. बाँझ उपकरण है कि RNase मुक्त है हमेशा प्रयोगशाला के एक RNase मुक्त क्षेत्र में किया जाना चाहिए. यह केवल शाही सेना ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glycogen (5 mg/ml) | Ambion | 9510 | ||
| NanoDrop ND-100 | Thermo Scientific | ND-1000 | ||
| Pellet Pestles with Microfuge Tube | VWR | KT749520-0090 | ||
| Phase Lock Gel Light, 1.5 ml | Eppendorf | 2302800 | ||
| Phenol, Tris-saturated | Roche Diagnostics | 3117944001 | ||
| RNAse Away | VWR | 17810-491 | ||
| RNAse-Free DNase Set | Qiagen | 79254 | ||
| RNEasy Mini Kit | Qiagen | 74104 | ||
| SuperScript® First-Strand Synthesis System for RT-PCR | Invitrogen | 11904-018 | ||
| TRIzol | Invitrogen | 15596-026 |
