孤立的高品质,完整的RNA是一个必不可少的步骤在许多实验室的协议。在这里,我们从整个斑马鱼的胚胎,随后应用在各种实验程序,包括基因表达芯片分析cDNA合成RNA的提取证明。
许多重要和复杂的实验室的程序,要求输入的高品质,完整的RNA。降级样品或杂质的存在可能导致灾难性的结果在下游的实验应用。因此,最重要的,使用坚实的技术与众多的保障措施和质量控制检查,以确保卓越的样本。在此,我们详细的协议隔离使用市售的化学变性和随后的清理,以去除DNA和使用商业RNA提取试剂盒杂质的痕迹,从整个斑马鱼胚胎的总RNA。作为RNA相对不稳定和轻松容易由核糖核酸酶裂解,大多数协议检测基因表达的cDNA的产品,是直接从RNA为模板合成。我们详细的程序转换成更稳定的cDNA使用市售的套件产品的RNA。纵观这些程序有多项质量控制检查,以确保样品不退化或受到污染的的。这些协议的最终产品是基因,是适合的芯片分析,RT – PCR或长期储存。
RNA分子的脆弱性是最重要的考虑因素,应成为本议定书记住。应始终使用无菌设备,无RNase在实验室无RNase区。储备的只适用于RNA的程序实验室的一部分,它是有帮助的。核糖核酸酶去除产品,如核糖核酸酶,远离此区域应经常喷洒。 RNA样本应始终带手套处理,并放在冰上,防止退化。
该协议利用市售的试剂和试剂盒。另外,还有许多额外的试剂和RNA分离试剂盒,市场上可?…
The authors have nothing to disclose.