माउस peritoneal गुहा कक्ष के अलगाव
Summary
स्तनधारियों में peritoneal गुहा अलग प्रतिरक्षा सेल सहज प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए महत्वपूर्ण आबादी शामिल हैं. एक कुशल अलगाव विधि इन कोशिकाओं के जैव रासायनिक और कार्यात्मक विश्लेषण के लिए आवश्यक है. यहाँ हम माउस में peritoneal गुहा कोशिकाओं के अलगाव के लिए एक व्यापक विधि प्रदान करते हैं.
Abstract
peritoneal गुहा स्तनधारियों की एक झिल्ली ही सीमित है और तरल पदार्थ से भरे उदर गुहा, जो जिगर, तिल्ली, गैस्ट्रो आंत्र पथ और अन्य आंत का सबसे शामिल है. यह मैक्रोफेज, बी कोशिकाओं और टी कोशिकाओं प्रतिरक्षा कोशिकाओं का एक संख्या बंदरगाहों. peritoneal गुहा में भोले मैक्रोफेज के एक उच्च संख्या की उपस्थिति भोले ऊतक निवासी मैक्रोफेज (1) के संग्रह के लिए एक पसंदीदा स्थल बना देता है. peritoneal गुहा भी है एक अद्वितीय peritoneal गुहा निवासी बी सेल सबसेट पारंपरिक B2 कोशिकाओं को अतिरिक्त B1 कोशिकाओं के रूप में में जाना जाता है की उपस्थिति की वजह से बी कोशिकाओं के अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण है. B1 कोशिकाओं B1a और B1b कोशिकाओं, जो CD11b और CD5 की सतह अभिव्यक्ति द्वारा प्रतिष्ठित किया जा सकता है में subdivided रहे हैं. B1 कोशिकाओं प्राकृतिक रोगज़नक़ों (2-4) की एक किस्म से जल्दी सुरक्षा प्रदान आईजीएम का एक महत्वपूर्ण स्रोत हैं. इन कोशिकाओं को प्रकृति (5) में autoreactive हैं, लेकिन वे कैसे autoimmunity को रोकने के लिए नियंत्रित कर रहे हैं अभी भी पूरी तरह से नहीं समझा जाता है. CD5, इसके विपरीत पर<sup> +</sup> B1a कोशिकाओं उनके आईएल 10 उत्पादन क्षमता (6) के पुण्य से कुछ विनियामक गुणों के अधिकारी हैं. इसलिए, peritoneal गुहा B1 कोशिकाओं एक दिलचस्प सेल करने के लिए उनके विविध समारोह और कई unaddressed उनके विकास और विनियमन के साथ जुड़े प्रश्नों की वजह से अध्ययन आबादी रहे हैं. peritoneal गुहा निवासी प्रतिरक्षा कोशिकाओं के अलगाव peritoneal गुहा के अंदर एक परिभाषित संरचना की कमी के कारण मुश्किल है. हमारी प्रोटोकॉल व्यवहार्य चूहों की peritoneal गुहा है, जो तब प्रवाह cytometry द्वारा और प्ररूपी विश्लेषण के लिए विभिन्न जैव रासायनिक और प्रतिरक्षाविज्ञानी assays के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है से प्रतिरक्षा कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए एक प्रक्रिया का वर्णन करेंगे.
Protocol
Discussion
Peritoneal गुहा कोशिकाओं के अलगाव अलग प्रतिरक्षा कोशिकाओं, मुख्य रूप से मैक्रोफेज और विशिष्ट बी सेल सबसेट के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण तकनीक है. हालांकि यह एक साधारण प्रक्रिया है, वहाँ कुछ महत्वपूर्ण कदम शामिल हैं. एकत्र नमूने में रक्त contaminating की उपस्थिति के लिए एक शुद्ध peritoneal गुहा सेल की आबादी को प्राप्त करने के लिए बचा जाना चाहिए. ग्रीवा अव्यवस्था द्वारा इच्छामृत्यु सावधानी से किया जाना चाहिए peritoneal गुहा में रक्त संक्रमण से बचने के लिए. वैकल्पिक रूप से सीओ 2 इस्तेमाल किया जा सकता है . इसके अलावा, उचित देखभाल प्रक्रिया के दौरान peritoneal गुहा में puncturing मूत्राशय या किसी भी अन्य अंगों से बचने के लिए लिया जाना चाहिए. इंजेक्शन तरल पदार्थ का सबसे पुनर्प्राप्त भी सेल उपज के लिए महत्वपूर्ण है.
इस प्रक्रिया को व्यापक रूप से निवासी के मध्यम संख्या से बृहतभक्षककोशिका जीव विज्ञान का अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है, unstimulated मैक्रोफेज peritoneal गुहा से आसानी से प्राप्त कर सकते हैं परिपक्व मैक्रोफेज में माइलॉयड पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं इन विट्रो में, फर्क बृहतभक्षककोशिका कॉलोनी उत्तेजक कारक (8 का उपयोग कर का श्रमसाध्य कार्य करने के लिए इसके विपरीत में, हो 9). peritoneal गुहा से बृहतभक्षककोशिका उपज thioglycollate निकालना पद्धति का उपयोग करके करके सुधार किया जा सकता है, हालांकि thioglycollate उपयोग मैक्रोफेज (7) के शारीरिक गुणों को बदल सकता है.
बी कोशिकाओं हमारी प्रतिरक्षा प्रणाली के दोनों सहज और प्रतिरक्षा अनुकूली में महत्वपूर्ण भूमिका निभा एक महत्वपूर्ण हिस्सा हैं. अलग बी सेल subpopulations के अलावा, B1 कोशिकाओं बी कोशिकाओं सहज रोगक्षमता, autoimmunity और प्रतिरक्षा विनियमन में शामिल की एक अद्वितीय सबसेट शामिल हैं. B1 कोशिकाओं को मुख्य रूप से peritoneal गुहा में स्थित हैं और स्वयं भरपाई कर रहे हैं. वे प्राकृतिक आईजीएम जो वायरस और बैक्टीरिया (10-12) की एक संख्या के खिलाफ सुरक्षा की पहली पंक्ति प्रदान करता है के प्राथमिक उत्पादकों में से एक हैं. B1 कोशिकाओं को भी 10-आईएल (6) है, जो एक महत्वपूर्ण प्रतिरक्षा विनियमन में शामिल साइटोकाइन है की एक प्रमुख स्रोत हैं. हालांकि कई अध्ययनों B1 कोशिकाओं के साथ जारी है, अभी भी उनकी विषम कार्यों के मूल्यांकन के लिए आगे गुंजाइश है, विशेष रूप से उनके नियामक भूमिका है. Peritoneal गुहा सेल अलगाव विधि अद्वितीय B1 कोशिकाओं के कार्यों का अध्ययन करने का अवसर प्रदान करता है.
Acknowledgements
इस काम के हिस्से में NIH अनुदान AI069358 और BloodCenter रिसर्च फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Thioglycollate Medium, Brewer Modified | BD BBL | 211716 |
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