Bukhålan hos däggdjur innehåller olika immunceller populationer avgörande för medfödda immunsvar. En effektiv isolering metod krävs för biokemiska och funktionella analyser av dessa celler. Här kan vi ge en heltäckande metod för isolering av bukhålan celler i musen.
I bukhålan är ett membranbundna och vätskefyllda bukhålan hos däggdjur, som innehåller lever, mjälte, de flesta av mag-tarmkanalen och andra inälvor. Det hamnar en rad av immunceller, inklusive makrofager, B-celler och T-celler. Förekomsten av ett stort antal naiva makrofager i bukhålan gör det till en önskad plats för insamling av naiva makrofager vävnad bosatt (1). Bukhålan är också viktigt att studera B-celler på grund av förekomsten av en unik bukhålan hemmahörande B-cells delmängd kallas B1 celler i tillägg till konventionell B2 celler. B1 celler är indelade i B1a och B1b celler, som kan skiljas av ytan uttryck för CD11b och CD5. B1 celler är en viktig källa till naturlig IgM ger tidigt skydd mot en rad olika patogener (2-4). Dessa celler är autoreaktiva i naturen (5), men hur de styrs för att förhindra autoimmunitet är fortfarande inte förstår helt. Tvärtom, CD5<sup> +</sup> B1a celler har några reglerande egenskaper på grund av deras IL-10 som producerar kapacitet (6). Därför bukhålan B1 celler är en intressant cellpopulation att studera på grund av deras olika funktion och många oadresserade frågor i samband med deras utveckling och reglering. Isolering av bukhålan bosatt immunceller är knepigt på grund av avsaknaden av en definierad struktur inne i bukhålan. Vårt protokoll kommer att beskriva ett förfarande för att få livskraftiga immunceller från bukhålan på möss, som sedan kan användas för fenotypisk analys av flödescytometri och för olika biokemiska och immunologiska analyser.
Isolering av bukhålan celler är en viktig teknik för studier av olika immunceller, främst makrofager och specifika B delmängder cell. Även om detta är en enkel process, det finns vissa kritiska inblandade steg. Förekomst av kontaminerande blod i de insamlade prov bör undvikas för att få en ren peritoneal befolkning hålighet cell. Dödshjälp av halsdislokation bör göras noggrant för att undvika blodsmitta i bukhålan. Alternativt CO 2 kan användas. Dessutom bör under förfarandet ordentlig försiktighet iakttas för att undvika att punktera blåsan eller andra organ i bukhålan. Återställa det mesta av den injicerade vätskan är också viktigt att cellen avkastning.
Detta förfarande används flitigt för att studera makrofager biologi sedan måttliga antal invånare, kan ostimulerade makrofager lätt erhållas från bukhålan, i motsats till den mödosamma uppgiften att skilja myeloida stamceller till mogna makrofager in vitro, med hjälp av makrofag kolonistimulerande faktor (8 , 9). Den makrofager avkastningen från bukhålan kan förbättras med hjälp av thioglycollate framtagning metod, även thioglycollate användning kan förändra fysiologiska egenskaper makrofager (7).
B-celler är en viktig del av vårt immunsystem spelar avgörande roller i både medfödd och adaptiv immunitet. Mellan olika subpopulationer B-celler, B1 celler utgör en unik delmängd av B-celler som deltar i medfödd immunitet, autoimmunitet och immun reglering. B1 celler är främst belägna i bukhålan och är själv fylla på. De är en av de främsta producenterna av naturlig IgM som ger första raden av skydd mot ett flertal virus och bakterier (10-12). B1 celler är också en viktig källa för IL-10 (6), vilket är en viktig cytokin involverade i immunförsvaret reglering. Trots att flera studier har bedrivits med B1 celler, fortfarande finns det utrymme för ytterligare utvärdering av deras kontrasterande funktioner, speciellt deras reglerande roll. Bukhålan cell isolering metod ger en unik möjlighet att studera funktionen hos B1 celler.
Detta arbete stöddes delvis av NIH bidraget AI069358 och BloodCenter Research Foundation.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Thioglycollate Medium, Brewer Modified | BD BBL | 211716 |