استخدام SC1 (Pluripotin) لدعم MESC التجديد الذاتي في غياب LIF
Summary
وظائف عن طريق تثبيط SC1 المزدوج للرأس وجاب ERK1. نحن اختبار وظيفة SC1 في دعم خلية فأر ES التجديد الذاتي في غياب LIF وأظهرت أن SC1 غير قادرة على الحفاظ على الذات تجديد الخلايا ES الثقافات الماوس.
Abstract
تستزرع تقليديا الماوس الجذعية الجنينية (ES) مع خلايا اللوكيميا عامل المثبط (LIF) للحفاظ على الذات التجديد.<sup> 1</sup> ومع ذلك ، LIF مكلفة وليس تفعيل المسار LIF/JAK/STAT3 المطلوب تماما للحفاظ على حالة التجديد الذاتي.<sup> 2</sup> قد يكون جزيء صغير SC1 بديلا اقتصاديا لLIF. وظائف عن طريق تثبيط SC1 المزدوج للرأس وجاب ERK1.<sup> 3</sup> رسم توضيحي لآلية عملها يجعلها أداة مفيدة لدراسة الآلية الجزيئية الأساسية التجديد الذاتي. نحن هنا لشرح الداخلي للخلايا الفأر في زراعة وفاق وجود SC1 وتظهر أنها قادرة على الحفاظ على تجديد الذاتي في غياب LIF. وأظهرت الخلايا المستزرعة مع SC1 التشكل مماثلة مقارنة مع المحافظة على الخلايا LIF. عرضت كلا نموذجي مورفولوجيا ES الماوس بعد خمس فقرات. ولوحظ تعدد القدرات التعبير عن علامات نموذجي (Oct4 ، Sox2 ، Nanog وSSEA1) بعد خمس فقرات في حضور SC1. وعلاوة على ذلك ، تسبب أي سمية SC1 العلني على خلايا ES الماوس.
Protocol
Discussion
يمكن استخدام SC1 جزيء صغير للحفاظ على الذات التجديد مع دولة غير متمايزة في الخلايا ES الماوس. قبل استخدام على خط الخلية التي لم تختبر ، ومع ذلك ، ينبغي معاير لتحديد تركيز الأمثل. على سبيل المثال ، نحن اختبار ثلاثة تركيزات على الخلية ES الماوس R1 ESC الخط. 100 نانومتر و 300 نانومتر التركيزات كانت قادرة على الحفاظ على خلايا ES الماوس ، ومع ذلك ، كان التركيز فيها 1 ميكرومتر السامة.
ويمكن أيضا أن تستخدم تحت SC1 تغذية خالية من الشروط.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الكتاب أود أن أشكر الدكتور شينج دينج من معهد سكريبس للبحوث والدكتور دنغ Hongkui من جامعة بكين للحصول على المساعدة والتوجيه.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SC1 | Stemgent | 04-0011 | ||
| LIF | Millipore | ESG1107 | ||
| SSEA-1 antibody | Santa Cruz | 21702 | ||
| Nanog antibody | Abcam | ab21603 | ||
| Sox2 antibody | Chemicon | Ab5603 | ||
| Oct4 antibody | Santa Cruz | SC-5279 |
References
- Williams, R. L., Hilton, D. J., Pease, S., Willson, T. A., Stewart, C. L., Gearing, D. P., Wagner, E. F., Metcalf, D., Nicola, N. A., Gough, N. M. Myeloid leukaemia inhibitory factor maintains the developmental potential of embryonic stem cells. Nature. 336, 684-687 (1988).
- Ying, Q. L., Wray, J., Nichols, J., Batlle-Morera, L., Doble, B., Woodgett, J., Cohen, P., Smith, A. The ground state of embryonic stem cell self-renewal. Nature. 453, 519-523 (2008).
- Chen, S., Do, J. T., Zhang, Q., Yao, S., Yan, F., Peters, E. C., Scholer, H. R., Schultz, P. G., Ding, S. Self-renewal of embryonic stem cells by a small molecule. Proc. Natl. Acat. Sci. USA. 103, 17266-17271 (2006).
