Генетические исследования у дрожжей могут быть использованы для исследования молекулярных и клеточных функций генов человека в клеточный метаболизм ДНК. Описаны методы генетической характеристике человека<em> WRN</em> Продукт гена дефекты преждевременного старения расстройства синдром Вернера в функционально сохраняется пути использования дрожжей, как послушный модели системы.
Abstract
Понимание роли человеческих белков репарации ДНК в генетических путей является сложной задачей для многих исследователей. Генетические исследования млекопитающих системы были ограничены из-за отсутствия доступных инструментов, включая генетический мутант определены клеточных линий, систем регулирования выражения, а также соответствующие выбор маркеров. Чтобы обойти эти трудности, модель генетических систем в низших эукариот стали привлекательным выбором для изучения функционально сохраняется репарации ДНК белков и путей. Мы разработали модель системы дрожжей учиться плохо определенными генетическими функциями синдром Вернера геликазы-нуклеазы (<em> WRN</em>) В метаболизма нуклеиновых кислот. Сотовая фенотипов связано с определенными генетическими мутант фоны могут быть исследованы, чтобы прояснить клеточные и молекулярные функции<em> WRN</em> Через свою каталитическую деятельность и белковых взаимодействий. Человека<em> WRN</em> Гена и связанные с ними варианты, клонированы в ДНК плазмид для экспрессии в дрожжах, могут быть помещены под контроль нормативных плазмиды элемента. Выражение конструкция может быть преобразована в соответствующую дрожжей мутант фон, и генетическая функция анализировали с помощью различных методик. Используя этот подход, мы определили, что<em> WRN</em>, Как и связанные с ним семью RecQ членов BLM и Sgs1, работает в топ3-зависимого пути, которая может иметь важное значение для стабильности генома. Это описано в нашей недавней публикации [1] в<a href="http://www.impactaging.com"> Www.impactaging.com</a>. Подробные методы специфической анализы для генетических исследований дополнения в дрожжах приведены в этой статье.
Одной из сильных сторон использования дрожжей в качестве модельной системы является наличие мутантов в определенных репликации ДНК и ремонт путей, которые сохраняются между дрожжей и людей. Дальнейший отбор трансформантов укрывательство определенных генов просто и надежно, как лабо…
Acknowledgements
Эта работа была поддержана в полном объеме Внутренние программы исследований NIH, Национальный институт по проблемам старения. Мы благодарим д-р Родни Ротштейн (Колумбийский университет) для штаммов дрожжей и доктор Брэд Джонсон (Университет Пенсильвании, Школа медицины, Филадельфия, штат Пенсильвания) для выражения SGS1 плазмиды.
Aggarwal, M., Brosh Jr., R. M. Genetic Studies of Human DNA Repair Proteins Using Yeast as a Model System . J. Vis. Exp. (37), e1639, doi:10.3791/1639 (2010).