एक microfluidic आइलेट perifusion डिवाइस कई islets और कैल्शियम बाढ़ और mitochondrial संभावित परिवर्तनों के साथ – साथ प्रतिदीप्ति इमेजिंग के गतिशील इंसुलिन स्राव के मूल्यांकन के लिए विकसित किया गया था.
Abstract
एक microfluidic आइलेट perifusion डिवाइस कई islets और कैल्शियम बाढ़ और mitochondrial संभावित परिवर्तनों के साथ – साथ प्रतिदीप्ति इमेजिंग के गतिशील इंसुलिन स्राव के मूल्यांकन के लिए विकसित किया गया था. डिवाइस तीन परतों के होते हैं: पहली परत microscale (500 सुक्ष्ममापी व्यास और 150 सुक्ष्ममापी गहराई) कुओं कि islets स्थिर जबकि प्रवाह और islets के उजागर सतह क्षेत्र को अधिकतम करने के लिए उजागर करने में मदद की एक सरणी शामिल हैं, दूसरी परत एक परिपत्र शामिल perifusion कक्ष (3 गहरी मिमी, 7 मिमी व्यास), और तीसरी परत एक इनलेट चैनल मिश्रण होता है कि प्रशंसकों के बाहर पहले perifusion चेंबर में अनुकूलन के लिए इंजेक्शन (चौड़ाई में 2 मिमी, लंबाई में 19 मिमी, और ऊंचाई में 500 सुक्ष्ममापी) मिश्रण दक्षता से पहले perifusion कक्ष में प्रवेश करने के लिए. एक रेखीय, घंटी आकार सहित विभिन्न ग्लूकोज gradients, और वर्ग आकार के निर्माण microfluidic perifusion नेटवर्क में भी बनाया जा सकता है और प्रदर्शन.
Protocol
3 परत perifusion microfluidic डिवाइस के ए Microfabrication नीचे खैर मास्टर प्रोटोकॉल (150 सुक्ष्ममापी गहरे कुओं) एक रेजर ब्लेड का उपयोग अगर जरूरत वफ़र साफ़. एसीटोन, मेथनॉल, और आईपीए के साथ साफ. 50 वाट में 30 एस के लिए प्लाज?…
Discussion
पारंपरिक आइलेट perifusion सिस्टम (macroscale और microscale) सेटअप और डिजाइन, उच्च तकनीकी आवश्यकताओं, और प्रणाली में उपयोगकर्ता निर्धारित रासायनिक gradients बनाने की कठिनाई के परिसर सहित कुछ सीमाएँ है. microfluidic perifusion यहाँ वर्णित प्रण…
Acknowledgements
इस काम Adeola Adewola, NIH / (U42RR023245) NCRR जोस Oberholzer, और शिकागो मधुमेह परियोजना AAUW अंतरराष्ट्रीय फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था.
Adewola, A. F., Wang, Y., Harvat, T., Eddington, D. T., Lee, D., Oberholzer, J. A Multi-Parametric Islet Perifusion System within a Microfluidic Perifusion Device. J. Vis. Exp. (35), e1649, doi:10.3791/1649 (2010).