微流控自动化血液循环核细胞富集的裂解协议

Summary

发展循环通过红细胞裂解，以确保高质量的样品无细胞损失隔离外周血有核细胞富集自动化微流体装置。

Abstract

一个自动化微流体血液裂解装置的协议，在本报告中详细介绍。循环有核细胞（CNCS），包括白细胞和内皮细胞，提供一个理想的平台，为个人的免疫状态的更新状态。微流体协议允许无选择性的细胞损失和样品制备变性，由于用户介导的步骤浓缩的CNC。简单地说，协议包括设备制造，样品的采集，设备安装，并通过微腔血。整个器件内的血液迅速去离子水混合，在约10秒50微米× 150微米的微流体通道。在这个时间跨度红细胞裂解由于低渗条件。通道底部的人字形结构，确保充分混合细胞暴露为一个恒定的环境。剩余的单元格返回等渗条件下，在设备的出口，用2％多聚甲醛固定，离心分离CNC的红细胞碎片，并在流缓冲暂停染色和流式细胞仪分析。结果表明清洁流式细胞仪散点图数控保存种群。这种设备和协议的意义数控人口分析疾病的发病机制的研究和理解。因此，自动化，实效性，简单的微流控协议证明。

Protocol

第1部分。微流控设备制造创建一个微流体裂解装置的硅母模使用标准光刻技术与设备，在路易斯维尔洁净室大学[1]。 AutoCAD的（欧特克公司，圣拉菲尔，CA）是用来生成一个透明的面具（Fineline成像，科罗拉多州的斯普林斯，CO），创建渠道的负面副本。从硅掌握使用弹性体聚二甲基硅氧烷（PDMS;道康宁，美联，MI）的软光刻技术的模具制造微流体裂解装置。弹性体与复制的渠道?…

Discussion

一个自动化微流体血液溶解协议的报道。值得一提的是在协议的关键步骤。在第P.2.1，重要的是要丢弃的血液小瓶样品中含有成熟的内皮细胞脱落，误报收集。另外，还要确保运行一小时内收集的血液样本。底漆第P.2.2微流体装置，它是重要的，初步摆脱了气泡。此外，应避免引入气泡时附加新的整个协议的针头注射器。 P.2.4节血1 ml注射器灌装时，一定要记住先添加1X PBS和血液，所有同时保持垂?…

Materials