Automatiserad Mikroflödessystem Blod Lysis protokoll för anrikning av cirkulerande celler med kärnor

Summary

En automatiserad mikroflödessystem enhet har utvecklats för att pumpa runt kärnförsedda cell anrikning från perifert blod via erytrocyt lys som garanterar isolering av hög kvalitet prov utan cell förlust.

Abstract

I denna rapport protokollet för en automatiserad mikroflödessystem blod lys enheten är detaljerad. Cirkulerande celler med kärnor (CNC), inklusive leukocyter och endotelceller, ger en idealisk plattform för en uppdaterad status på immunförsvaret tillstånd en individ. Den mikroflödessystem protokollet tillåter anrikning av CNC-system utan selektiva cell förlust och provberedning variationer beroende på användarens-medierad steg. Kortfattat innehåller Protocol Device tillverkning, provtagning, Enhetsinställningar och köra blod genom mikroflödessystem kammaren. Inom enheten helblod snabbt blandas med avjoniserat vatten i ca 10 sekunder i en 50 micron x 150 micron mikroflödessystem kanal. I denna tidsperiod erytrocyter lyseras på grund av hypoton förhållanden. Herringbone strukturer på botten av kanalen säkerställa omsorgsfull blandning och exponering av celler med en konstant miljö. Resterande celler tillbaka till isoton förhållandena vid utgången av enheten, fast med 2% paraformaldehyd, centrifugeras för att separera erytrocyt skräp från CNC-system, och suspenderade i flödet buffert för färgning och analys med flödescytometri. Resultaten visar rena flödet tomter cytometry scatter med CNC sparade populationer. Betydelsen av denna enhet och protokoll levereras i studien och förståelse för sjukdomen patogenes genom analys av CNC-populationer. Därför är automatisering, effektivitet och enkelhet mikroflödessystem protokollet visade.

Protocol

Del 1. Mikroflödessystem Komponentframställning En kisel mästare form av mikroflödessystem lys-enheten skapades med hjälp av vanliga fotolitografiska tekniker med utrustning i University of Louisville renrum [1]. AutoCAD (Autodesk, Inc., San Rafael, Kalifornien) användes för att generera en öppenhet mask (Fineline Imaging, Colorado Springs, CO) för att skapa negativa repliker av kanaler. Den mikroflödessystem lys enhet var tillverkat av kisel mästare formen med mjuka litografiska te…

Discussion

En automatiserad mikroflödessystem blod lys-protokollet har rapporterats. I protokollet är kritiska steg värt att notera. I avsnitt P.2.1 är det viktigt att göra den första blod flaskan som samlats in som provet innehåller rubbas mogna endotelceller agerar som falska positiva. Se också till att driva blodprovet inom en timme efter provtagning. Kontroll av mikroflödessystem enheten i avsnitt P.2.2 är det viktigt att först bli av med bubblor. Dessutom bör man undvika att införa bubblor när du sätter nya spr…

Materials