Summary

La médula espinal de Electrofisiología

Published: January 18, 2010
doi:

Summary

Una demostración del aislamiento de la médula espinal de ratón neonatal para los estudios electrofisiológicos.

Abstract

El cordón espinal de ratón recién nacido es un modelo para estudiar el desarrollo de circuitos neuronales y el movimiento del aparato locomotor. Nos demuestran que la disección de la médula espinal y la preparación del baño de grabación de líquido cefalorraquídeo artificial utilizado para estudios del aparato locomotor. Una vez disecado, las raíces nerviosas de la médula espinal ventral puede ser conectado a un electrodo de registro para registrar las señales electrofisiológicas de los circuitos generadores de patrones centrales dentro de la médula lumbar.

Protocol

1. Prepare líquido cefalorraquídeo artificial (ACSF) 1. En primer lugar, preparar un 2 litros de un depósito de 10 veces LCRa sin magnesio o calcio. Reactivos enumerados en milimolar. Los números de catálogo se refieren a Sigma / Aldrich. 2 Litros 10X LCRa (sin Mg o Ca) Reactivo mM g/2L Catálogo KCl 40 5.96 P…

Discussion

El aislado de la médula espinal neonatal proporciona un método manejable de estudiar el sistema nervioso desarrollo1, 2. Dentro de la médula lumbar espinal de roedores recién nacidos, los circuitos centrales de generación de patrones puede producir locomoción ficticia en la presencia de neurotransmisores. Esta locomoción ficticia consiste en aumentos de ritmo en la actividad, las explosiones, que se producen en el 0,2 a 0,5 Hz. Estas explosiones se organizan para producir la alternancia izquierda-derecha a lo lar…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Samuel L. Pfaff es profesor en el Laboratorio de Expresión Génica en el Instituto Salk de Estudios Biológicos y un investigador en el Instituto Médico Howard Hughes. Este trabajo fue apoyado por el Christopher y Dana Reeve Foundation. Joe Belcovson, Schnoeker Kent y Mike Sullivan en Recursos Multimedia en el Instituto Salk proporcionó asistencia con la fotografía y la edición.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
KCl     P-9333  
NaCl     S-7653  
NaHCO3     S-6297  
NaH2PO4     S-9638  
Glucose     D-9434  
CaCl2     C-5080  
MgSO4     M-5921  
Large Scissors   Fine Science Tools 14070-12  
Forceps   Fine Science Tools 11050-10  
Fine Scissors   Fine Science Tools 15000-10  
Insect pins   Fine Science Tools 26002-10  
Sylgard 184 (Dow-Corning)        
1L volumetric flask        
100mL volumetric flask        

References

  1. Myers, C. P. Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits. Neuron. 46, 37-49 (2005).
  2. Goulding, M., Pfaff, S. L. Development of circuits that generate simple rhythmic behaviors in vertebrates. Curr Opin Neurobiol. 15 (1), 14-20 (2005).
  3. Gallarda, B. Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling. Science. 320, (2008).
  4. Gosgnach, S. V1 spinal neurons regulate the speed of vertebrate locomotor outputs. Nature. 440 (7081), 215-219 (2006).
  5. Lanuza, G. M., Gosgnach, S., Pierani, A., Jessell, T. M., Goulding, M. Genetic identification of spinal interneurons that coordinate left-right locomotor activity necessary for walking movements. Neuron. 42 (3), 375-386 (2004).
  6. Jiang, Z., Carlin, K. P., Brownstone, R. M. An in vitro functionally mature mouse spinal cord preparation for the study of spinal motor networks. Brain Res. 816 (2), 493-499 (1999).
  7. Ziskind-Conhaim, L., Gao, B. X., Hinckley, C. Ethanol dual modulatory actions on spontaneous postsynaptic currents in spinal motoneurons. J Neurophysiol. 89 (2), 806-813 (2003).
  8. Tabak, J., Rinzel, J., O’Donovan, M. J. The role of activity-dependent network depression in the expression and self-regulation of spontaneous activity in the developing spinal cord. J Neurosci. 21 (22), 8966-8978 (2001).
  9. Chub, N., Mentis, G. Z., O’Donovan, M. J. Chloride-sensitive MEQ fluorescence in chick embryo motoneurons following manipulations of chloride and during spontaneous network activity. J Neurophysiol. 95 (1), 323-330 (2006).
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Cite This Article
Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. Spinal Cord Electrophysiology. J. Vis. Exp. (35), e1660, doi:10.3791/1660 (2010).

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