हवाई कट दुम व्यंग्य से Hemocytes प्राप्त Euprymna scolopes और सहजीवी और गैर सहजीवी जीवाणु के लिए उनके पालन अवलोकन
Summary
इस वीडियो में प्रदर्शन करेंगे कैसे प्राप्त करने के लिए हवाई कट दुम विद्रूप से hemocytes (रक्त कोशिकाओं),<em> Euprymna scolopes</em> सेल जैविक और बैक्टीरियल आसंजन assays में उपयोग के लिए. Hemocytes एक फ्लोरोसेंट रंजक के साथ दाग हो जाएगा और GFP-लेबल बैक्टीरिया को उजागर किया.
Abstract
फायदेमंद बैक्टीरिया और उनके मेजबान के बीच आणविक संकेत mediating में प्रतिरक्षा प्रणाली की भूमिका के विषय में अध्ययन, हाल के वर्षों में है, उनके microbiota के साथ eukaryotes के सह विकास की हमारी समझ के लिए महत्वपूर्ण योगदान दिया. हवाई कट दुम व्यंग्य के बीच सहजीवी संघ,<em> Euprymna scolopes</em> और bioluminescent जीवाणु<em> विब्रियो fischeri</em> जानवर विकास पर फायदेमंद बैक्टीरिया के प्रभाव को समझने के लिए एक मॉडल प्रणाली के रूप में उपयोग किया गया है. हाल के अध्ययनों से पता चला है कि बृहतभक्षककोशिका तरह hemocytes, व्यंग्य मेजबान सहज प्रतिरक्षा प्रणाली की एकमात्र सेलुलर घटक, संभावना इस संघ की स्थापना और रखरखाव mediating में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं. इस प्रोटोकॉल का प्रदर्शन कैसे hemocytes से प्राप्त करने के लिए<em> ई. scolopes</em> और तो बैक्टीरियल बाध्यकारी assays में इन कोशिकाओं का उपयोग करें. वयस्क विद्रूप पहले anesthetized पहले hemolymph सिरिंज द्वारा मुख्य मस्तक का रक्त वाहिका से एकत्र किया जाता है. मेजबान hemocytes निकाले hemolymph में निहित है, संभाग कांच coverslips का पालन कर रहे हैं और फिर से हरे रंग का फ्लोरोसेंट प्रोटीन लेबल सहजीवी उजागर<em> विब्रियो fischeri</em> और गैर – सहजीवी<em> विब्रियो harveyi</em>. hemocytes एक फ्लोरोसेंट रंजक (सेल ट्रैकर ऑरेंज, Invitrogen) के साथ counterstained हैं और फिर फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का उपयोग कल्पना.
Protocol
Discussion
फायदेमंद बैक्टीरिया और उनके मेजबान के बीच आणविक संकेत mediating में प्रतिरक्षा प्रणाली की भूमिका के विषय में अध्ययन, हाल के वर्षों में है, उनके microbiota के साथ eukaryotes के सह विकास की हमारी समझ के लिए महत्वपूर्ण योगदा…
Acknowledgements
अनुदान स्रोत: विश्वविद्यालय कनेक्टिकट रिसर्च फाउंडेशन और आण्विक और सेल बायोलॉजी के विभाग के SVN, सिग्मा ग्यारहवीं अनुदान सहायता के अनुसंधान और एंटोनियो एच. और Majorie आर.
रोमानो स्नातक शिक्षा AJC फैलोशिप
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
| 26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
| SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
| SP2 Confocal Microscope | Leica |
References
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).
- McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism. Science. 254, 1491-1494 (1991).
- Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes. Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis. Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).
- Nyholm, S. V., Stabb, E. V., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Establishment of an animal-bacterial association: recruiting symbiotic Vibrios from the environment. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 10231-10235 (2000).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri. Biol Bull. 195, 89-97 (1998).
- Visick, K. L., Ruby, E. G. Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango. Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).
