Skaffa hemocyter från Hawaiian Bobtail Squid Euprymna scolopes Och observera att de följer Symbiotiska och icke-symbiotiska bakterier
Summary
Denna video kommer att visa hur man kan få hemocyter (blodkroppar) från Hawaiian stubbsvans bläckfisk,<em> Euprymna scolopes</em> För användning i cellbiologiska och bakteriell vidhäftning analyser. Hemocyter kommer att färgas med ett fluorescerande färg och utsätts för GFP-märkta bakterier.
Abstract
Undersökningar roll i immunsystemet att medla molekylär signalering mellan nyttiga bakterier och deras värdar har under de senaste åren gjort betydande bidrag till vår förståelse av samevolution av eukaryoter med mikrober. Den symbiotiska samband mellan Hawaiian stubbsvans bläckfisk,<em> Euprymna scolopes</em> Och den självlysande bakterie<em> Vibrio fischeri</em> Har använts som modellsystem för att förstå effekterna av nyttiga bakterier på djurens utveckling. Nyligen genomförda studier har visat att makrofager-liknande hemocyter, den enda cellulära del av bläckfisk värdens medfödda immunförsvaret, sannolikt spelar en viktig roll som medlare upprättande och underhåll av denna förening. Detta protokoll kommer att visa hur man kan få hemocyter från<em> E. scolopes</em> Och sedan använda dessa celler i bakterie bindande analyser. Vuxen bläckfisk är först bedövas innan hemolymph samlas in av sprutan från den huvudsakliga cefaliska blodkärl. Värden hemocyter, som finns i den extraherade hemolymph, följs chambered glas täckglas och sedan utsätts för grönt fluorescerande protein-märkta symbiotiska<em> Vibrio fischeri</em> Och icke-symbiotiskt<em> Vibrio harveyi</em>. Den hemocyter är counterstained med en fluorescerande färg (Cell Tracker Orange, Invitrogen) och sedan visualiseras med fluorescerande mikroskopi.
Protocol
Discussion
Undersökningar roll i immunsystemet att medla molekylär signalering mellan nyttiga bakterier och deras värdar har under de senaste åren gjort betydande bidrag till vår förståelse av samevolution av eukaryoter med mikrober. Den squid / Vibrio-systemet har visat sig vara en lätthanterlig modell för att besvara grundläggande frågor inom detta område 2,3,5,6,8. Ljuset-organ i bläckfisk Euprymna scolopes tillåter kolonisering uteslutande av självlysande bakterien Vibrio fischeri. E…
Acknowledgements
Finansieringskällor: University of Connecticut Research Foundation och Institutionen för molekylär och cellbiologi till SVN, Sigma Xi Grant-i-Aid-för forskning och Antonio H. och Majorie R.
Romano forskarutbildning Fellowship till AJC
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
| 26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
| SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
| SP2 Confocal Microscope | Leica |
References
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).
- McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism. Science. 254, 1491-1494 (1991).
- Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes. Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis. Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).
- Nyholm, S. V., Stabb, E. V., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Establishment of an animal-bacterial association: recruiting symbiotic Vibrios from the environment. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 10231-10235 (2000).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri. Biol Bull. 195, 89-97 (1998).
- Visick, K. L., Ruby, E. G. Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango. Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).
