항체 라벨링에 대한 Drosophila Polytene의 염색체 Squashes의 준비
Summary
이 비디오 프로토콜은 준비하는 요한센 실험실에서 사용되는 스쿼시 기법을 보여줍니다<em> Drosophila</em항체 라벨에 대한> polytene 염색체.
Abstract
Drosophila 오래 염색질 구조와 셋째 instar의 애벌레의 거대한 침샘 polytene 염색체에서 제공하는 cytological 장점으로 인해 유전자 규제 사이의 관계를 공부 좋아하는 모델 시스템을하고 있습니다. 이 조직에서 염색체는 약 1000 사본을 상승을주는 세포 분열의 부재에서 복제의 많은 순찰을 받고있다. DNA는 특정 단백질의 지방화로 염색질 형태를 상호 연관시킬 수있는 독특한 기회를 제공합니다 크게 확대 염색체의 결과로 각 replicative 사이클 이후에 정렬 남아있다. 따라서, 다른 유전자에 존재하는 epigenetic 수정 정의 및 전사 프로세스의 여러 단계에서 관심이 높은 수준이되었습니다. 이러한 연구에 중요한 도구가 효소에 항체와 polytene 염색체의 라벨, 전사 인자, 또는 관심 히스톤 수정입니다. 이 비디오 프로토콜은 항체 라벨에 대한 Drosophila polytene 염색체를 준비 요한센 실험실에서 사용되는 스쿼시 기술을 보여줍니다.
Protocol
Discussion
기존 스쿼시 고정 프로토콜의 아세트산과 젖산 지방산의 포함은 확산 interband 해상도와 염색체 팔 모두를 용이하게하지만, 불행히도 일부 epitopes이 치료를 생존하지 않습니다. 이러한 에피토프의 예는 H3S10ph입니다 (까 외., 2008). 산성 치료 또한 GFP – 태그 단백질, DiMario 외의 고유의 형광을 꺼버리는 그 단점을 가지고 있기 때문에. (2006) 최근에 산성에 민감한 epitopes의 항체 검출을위한 …
Acknowledgements
비행기는 주식이 작품은 건강 그랜트 (GM62916)과 국립 과학 재단 (National Science Foundation) 부여 (MCB0817107)에 대한 국립 연구소에 의해 지원되었다의 유지 보수를 위해 양 V. Lephart 감사합니다.
References
- Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila. Development. 135, 2917-2925 (2008).
- DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes. Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).
- Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies. Methods. 48, 387-397 (2009).
