이 비디오 프로토콜은 준비하는 요한센 실험실에서 사용되는 스쿼시 기법을 보여줍니다<em> Drosophila</em항체 라벨에 대한> polytene 염색체.
Abstract
Drosophila 오래 염색질 구조와 셋째 instar의 애벌레의 거대한 침샘 polytene 염색체에서 제공하는 cytological 장점으로 인해 유전자 규제 사이의 관계를 공부 좋아하는 모델 시스템을하고 있습니다. 이 조직에서 염색체는 약 1000 사본을 상승을주는 세포 분열의 부재에서 복제의 많은 순찰을 받고있다. DNA는 특정 단백질의 지방화로 염색질 형태를 상호 연관시킬 수있는 독특한 기회를 제공합니다 크게 확대 염색체의 결과로 각 replicative 사이클 이후에 정렬 남아있다. 따라서, 다른 유전자에 존재하는 epigenetic 수정 정의 및 전사 프로세스의 여러 단계에서 관심이 높은 수준이되었습니다. 이러한 연구에 중요한 도구가 효소에 항체와 polytene 염색체의 라벨, 전사 인자, 또는 관심 히스톤 수정입니다. 이 비디오 프로토콜은 항체 라벨에 대한 Drosophila polytene 염색체를 준비 요한센 실험실에서 사용되는 스쿼시 기술을 보여줍니다.
Protocol
polytene 염색체 스쿼시 준비에 대해 다음 프로토콜은 요한센 외에서 설명한 절차에서 조정됩니다. (2009). 1. 셋째 instar Drosophila의 애벌레의 문화 고품질 스쿼시 준비를위한 최적의 polytene 염색체를 얻기 위해서는, 솟아 culturing 조건 (즉, 주위 20 달걀 누워 매일 새로운 병에 표준 4 "비행 병 및 변경에 여성 파리). 선택 뚱보 개인 필수입니다 그…
Discussion
기존 스쿼시 고정 프로토콜의 아세트산과 젖산 지방산의 포함은 확산 interband 해상도와 염색체 팔 모두를 용이하게하지만, 불행히도 일부 epitopes이 치료를 생존하지 않습니다. 이러한 에피토프의 예는 H3S10ph입니다 (까 외., 2008). 산성 치료 또한 GFP – 태그 단백질, DiMario 외의 고유의 형광을 꺼버리는 그 단점을 가지고 있기 때문에. (2006) 최근에 산성에 민감한 epitopes의 항체 검출을위한 …
Acknowledgements
비행기는 주식이 작품은 건강 그랜트 (GM62916)과 국립 과학 재단 (National Science Foundation) 부여 (MCB0817107)에 대한 국립 연구소에 의해 지원되었다의 유지 보수를 위해 양 V. Lephart 감사합니다.
Cai, W., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling. J. Vis. Exp. (36), e1748, doi:10.3791/1748 (2010).