अलगाव और चूहा mesenchymal स्टेम सेल के संवर्धन (MSCs) और एकल कॉलोनी के पृथक्करण MSCs व्युत्पन्न
Summary
चूहा MSCs femurs और tibias से अलग किया गया और फिर चुंबकीय सेल छँटाई से समृद्ध है. क्रमबद्ध करें कोशिकाओं प्रवाह cytometry द्वारा सतह मार्करों की अभिव्यक्ति के लिए पुष्टि की गई. इन कोशिकाओं को भी clonal घनत्व सुसंस्कृत थे एकल कालोनियों के रूप में और फिर इन कालोनियों क्लोनिंग सिलेंडरों से अलग हो गए थे.
Abstract
MSCs वयस्क स्टेम सेल की आबादी है कि चिकित्सीय अनुप्रयोगों के लिए एक आशाजनक स्रोत रहे हैं. इन कोशिकाओं को अस्थि मज्जा से अलग किया जा सकता है और आसानी से hematopoietic स्टेम कोशिकाओं (HSCs) उनकी प्लास्टिक पालन करने के लिए कारण से अलग कर सकते हैं. इस प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे चूहे femurs और tibias से MSCs को अलग करने के लिए. अलग कक्षों के आगे दो MSCs CD54 सतह चुंबकीय सेल छँटाई के द्वारा और मार्कर CD90 के खिलाफ समृद्ध थे. सतह CD54 और CD90 मार्करों की अभिव्यक्ति तो प्रवाह cytometry विश्लेषण द्वारा की पुष्टि की थी. HSC मार्कर CD45 भी चेक अगर सॉर्ट किया गया MSCs HSCs की समाप्त हो गया शामिल किया गया था. MSCs स्वाभाविक रूप से काफी विषम हैं. वहाँ कोशिकाओं है कि अलग अलग आकार, प्रसार, और भेदभाव क्षमताओं है की subpopulations हैं. इन subpopulations सभी ज्ञात MSCs मार्करों व्यक्त है और अलग subpopulations के लिए अभी तक कोई अद्वितीय मार्कर की पहचान की गई है है. इसलिए, एक वैकल्पिक दृष्टिकोण अलग subpopulations अलग क्लोनिंग सिलेंडरों का उपयोग कर रहा है बाहर एकल कॉलोनी व्युत्पन्न कोशिकाओं को अलग. एकल कालोनियों से निकाली गई कोशिकाओं तो और सुसंस्कृत किया जा सकता है अलग से मूल्यांकन.
Protocol
Discussion
इस प्रोटोकॉल का वर्णन और कैसे अलग है और MSCs समृद्ध है. एकल कॉलोनी व्युत्पन्न कोशिकाओं को अलग करने की विधि भी शामिल है. वहाँ कई कदम है कि एक सफल अलगाव संवर्धन, कॉलोनी और जुदाई के लिए महत्वपूर्ण हैं कर रहे है?…
Acknowledgements
काम के हिस्से में राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (R01GM079688, R21RR024439, और R21GM075838), राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (0,941,055 CBET), और MSU फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1X D-PBS | Invitrogen | 14040-133 | ||
| DMEM | Invitrogen | 11885-084 | ||
| Cell strainer | BD Bioscience | 352350 | ||
| FBS | Invitrogen | 26140-079 | ||
| Pen-Strep | Invitrogen | 15140 | ||
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| BD Imagnet | BD Bioscience | 552311 | ||
| Biotin mouse IgG2a | BD Bioscience | 555572 | ||
| Biotin mouse IgG1 | BD Bioscience | 555747 | ||
| Biotin anti-rat CD54 | Cedarlane Labs | CL054B | ||
| Biotin anti-rat CD90 | Cedarlane Labs | CL005B | ||
| Biotin anti-rat CD45 | Cedarlane Labs | CL001B | ||
| BD Imag buffer | BD Bioscience | 552362 | ||
| Round-bottom tube | BD Bioscience | 352063 | ||
| Streptavidin particles | BD Bioscience | 557812 | ||
| SA-PE | R&D systems | F0040 | ||
| Cloning cylinder | Sigma | C2059 |
References
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