이것은 일반적인 마우스 경동맥의 intraplaque 네오 - vascularization (4 주)와 방해 흐름 조건 및 후속 죽상 경화증 개발 (2 주) 원인 부분 경동맥 내고 수술을 설명합니다. 우리는 또한 고순도 내피 RNA를 제공하고, 경동맥 intima에서 RNA의 분리의 소설 방법을 설명합니다.
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방법 논문
부분 결합하여 마우스 경동맥 동맥에있는 방해 흐름 유발 죽상 경화증과 경동맥 내피로부터 RNA 분리의 간단한 방법의 모델
이 논문에서
요약
초록
잘 알려진 가까운 협회에도 불구하고, atherogenesis에 방해 흐름을 연결하는 직접적인 증거가 부족했습니다. 우리는 최근 경동맥 부분 결합 방식의 수정된 버전을 사용해야 [1,2]는 심하게 마우스 일반적으로 경동맥의 낮은 oscillatory 흐름 조건 방해 흐름의 두 주요 특성을 유도 것을 보여주기 위해. 이 모델을 사용, 우리는 방해 흐름이 실제로 Apolipoprotein E의 녹아웃 마우스에서 신속하고 강력한 죽상 경화증의 개발 [3] 단서가 확실한 증거를 제공하고 있습니다. 우리는 또한 마우스 경동맥 intima [3]에서 고순도로 내피 RNA 준비하는 방법을 개발했습니다. 이 마우스 모델과 방법을 사용하여, 우리는 그 부분 내고는 사주에 의해 그러한 intraplaque neovascularization 같은 복잡한 병변 형성의 기능과 함께 hyperlipidemic 마우스 모델에서 2 주내에 강력하고 빠른 atheroma의 형성에 의해 다음, 일주일에 내피 기능 장애의 원인이 발견했습니다. 이 급속한
프로토콜
1. 왼쪽 경동맥 부분 내고
- 생쥐는 세 ~ 8 주가되면 사용됩니다. 생쥐의 무게는 최소한 18g으로 권장합니다.
- 비드 악기 살균기 30 초 악기를 소독하고 진정 수
- 케타민을 (80mg/kg)과 Xylazine (10mg/kg) IACUC 승인으로 intraperitoneal (IP) 주입 또는 대체 마취와 마취를 유발. IP 주사, 복부의 왼쪽 낮은 사분면에 마우스를 주입.
- 완전히 anesthetized까지 온난 챔버에 넣어 마우스. 발가락 핀치에 대한 응답과 마취의 깊이를 확인합니다.
- 부정사 (배꼽 사이드까지) 위치에 수술 무대에서 플레이스 마우스. 테이프 포어 - 포스 야자수와 무대 아래로 뒷다리 - 싶단다 단독.
- mandible과 흉골 사이에 목에 depilatory 에이전트 교양 금액 (예 : 나이르)을 적용합니다. 부드럽게 마사지는 모든 머리가 제거됩니다 때까지.
- depilatory 에이전트를 청소하고 depilated 지역 Betadine의 자유 금액을 적용합니다.
- ligations에 대한 6-0 실크 봉합사의 1 인치 길이의 섹션을 준비합니다. 각 마우스 치료의 두 가지가 필요합니다.
- 날카로운 작은 가위를 사용하여....
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토론
이 절차에서는 외부 경동맥, 내부 경동맥, 후두 동맥과 우수한 갑상선 동맥을 포함한 일반적인 경동맥의 모든 지점의 적절한 신분증이 필요합니다. 시연으로 초음파를 사용하여 유동 패턴을 확인하는 것도 중요합니다. 우리의 경험 손에, 500 개 이상의 생쥐의 초음파 연구에 따라 부분 내고 수술의 성공 비율은 90 %보다 낫습니다. 경동맥 내막 RNA 준비 들어, 첫 번째 단계 재관류 후 경동맥의 모양에주의하는 것이 중요합니다. 이 시점에서 좌측 공통 경동맥의 흐름 차단의 증거가있다면, 우리는 추가 분석을 위해 이러한 샘플을 사용하지 않는 것이 좋습니다.
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감사의 글
이 작품은 과학, 기술 및 S. 한국의 교육부에서 NIH 기금 HL87012 (HJ), HL75209 (HJ), UO1HL80711 (DH, DG, HJ) 및 세계 클래스 대학 프로젝트 (HJ)의 기금에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 생리식염수 (0.9% sodium chloride) | Baxter Internationl Inc. | 2B1323 | |
| 인슐린 주사기 (3/10 ml 29g 주사기) | Tyco Healthcare, Covidien | 8881600145 | |
| HBSS | Cellgro | 21-023 | |
| miRNeasy mini kit (QIAzol 포함) | Qiagen | 217004 | |
| Vevo 770 고해상도 마이크로 이미징 시스템 | VisualSonics, inc. | a.Visualsonics 770 시스템 b.이미징 스테이지 c.Vevo 통합 레일 시스템 d.마우스용 RMV 스캔 헤드 | 또는 유사 시스템 |
| 6-0 Silk 봉합사, 멸균 | Covidien | s-1172 c2 | |
| 소형 가위 | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5675 | 또는 유사 제품 |
| 해부용 핀셋 | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5005 | 또는 유사 제품 |
| Tissue Mend II | Webster Veterinary | 07-856-7946 |
참고문헌
- Korshunov, V. A., Berk, B. C. Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).
- Sullivan, C. J., Hoying, J. B.
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재인쇄 및 허가
