MALDI नमूना तैयार: अल्ट्रा पतली परत मेथड
Summary
यह वीडियो मैट्रिक्स असिस्टेड लेजर desorption Ionization मास स्पेक्ट्रोमेट्री (MALDI एमएस) के द्वारा पेप्टाइड्स और प्रोटीन का विश्लेषण करने के लिए एक अति पतली परत / analyte मैट्रिक्स की तैयारी को दर्शाता है.
Abstract
यह वीडियो मैट्रिक्स की मदद से लेजर desorption Ionization मास स्पेक्ट्रोमेट्री (MALDI एमएस) 1, 2 द्वारा पेप्टाइड्स और प्रोटीन का विश्लेषण करने के लिए एक अति पतली परत / analyte मैट्रिक्स की तैयारी को दर्शाता है. अति पतली परत पद्धति मैट्रिक्स क्रिस्टल की एक सब्सट्रेट परत का नमूना थाली है, जो एक मिश्रण / मैट्रिक्स analyte के बाद crystallization के लिए एक बोने की जमीन के रूप में कार्य करता है पर उत्पादन (अल्फा cyano-4-hydroxycinnamic एसिड) शामिल है. अन्य नमूना बयान दृष्टिकोण (जैसे सूखे छोटी बूंद) से अधिक अति पतली परत विधि के लाभ हैं कि यह (i) के अधिक से अधिक ऐसे लवण और डिटर्जेंट, (ii) बेहतर संकल्प, और (iii) उच्च स्थानिक एकरूपता के रूप में दोष सहिष्णुता प्रदान करता है. इस विधि प्रोटीन का सटीक मास निर्धारण के लिए विशेष रूप से उपयोगी है. प्रोटोकॉल शुरू और विकसित किया गया था झिल्ली प्रोटीन के विश्लेषण के लिए और अनुकूलित करने के लिए सफलतापूर्वक आयन चैनल, metabolite ट्रांसपोर्टरों, और रिसेप्टर्स का विश्लेषण किया, 2 और 12 transmembrane 2 डोमेन के बीच युक्त. मूल प्रकाशन के बाद से, यह भी घुलनशील प्रोटीन का विश्लेषण के लिए समान रूप से उपयोगी हो सकता है दिखाया गया है. दरअसल, हम यह आणविक 380 3 केडीए के रूप में उच्च के रूप में जनता के साथ उन सहित, गुणों की एक विस्तृत श्रृंखला वाले प्रोटीन की एक बड़ी संख्या के लिए इस्तेमाल किया है. यह वर्तमान में सभी प्रोटीन की आणविक जन विश्लेषण के लिए हमारी पसंद की विधि है. वर्णित प्रक्रिया लगातार उच्च गुणवत्ता स्पेक्ट्रा के उत्पादन, और यह संवेदनशील, मजबूत, और लागू करने के लिए आसान है.
Protocol
Materials
It is critical that all reagents are of highest-quality (e.g. HPLC-grade).
Powder-free gloves (latex or nitrile)
Stainless steel or gold MALDI sample plate
Methanol (MeOH)
Water
Kimwipes
α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid (4-HCCA)
Trifluoroacetic acid (TFA) (final concentration in 0.1% in H2O)
Acetonitrile (ACN)
Formic acid
Isopropanol
References
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