के ट्रांसप्लांटेशन GFP chimeric Zebrafish भ्रूण में रेटिना और मस्तिष्क के विकास के लाइव इमेजिंग के लिए Blastomeres व्यक्त
Summary
हम embryogenesis दौरान रहते इमेजिंग सेलुलर व्यवहार के लिए प्रोटोकॉल chimeric zebrafish भ्रूण उत्पन्न प्रदर्शित करता है.
Abstract
कक्ष embryogenesis दौरान उनके स्थान और संपत्ति में बड़े पैमाने बदल जाते हैं. ये परिवर्तन कोशिकाओं और अपने वातावरण के बीच बातचीत द्वारा विनियमित रहे हैं. Chimeric भ्रूण है, जो अलग आनुवंशिक पृष्ठभूमि की कोशिकाओं से बना रहे हैं महान उपकरण के लिए ब्याज की जीन द्वारा मध्यस्थता सेल सेल बातचीत का अध्ययन कर रहे हैं. zebrafish के प्रारंभिक विकास चरणों में भ्रूण पारदर्शिता सेलुलर स्तर पर ऊतकों और अंगों के morphogenesis के प्रत्यक्ष दृश्य परमिट. यहाँ, हम एक chimeric zebrafish भ्रूण में retinas और दिमाग को उत्पन्न और दाता कोशिकाओं के रहते इमेजिंग प्रदर्शन प्रोटोकॉल प्रदर्शित करता है. प्रत्यारोपण सुई, का प्रत्यारोपण की तैयारी प्रोटोकॉल शामिल GFP-व्यक्त GFP-नकारात्मक मेजबान दाता blastomeres और दाता जीना confocal माइक्रोस्कोपी के अंतर्गत सेल व्यवहार की परीक्षा. मामूली संशोधनों के साथ, इस प्रोटोकॉल भी zebrafish में अन्य ऊतकों और अंगों के भ्रूण के विकास का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. लेबल दाता कोशिकाओं को GFP का उपयोग करने के फायदे भी चर्चा कर रहे हैं.
Protocol
Discussion
इस वीडियो में, हम blastomere प्रत्यारोपण के लिए एक विधि zebrafish में रेटिना और मस्तिष्क के विकास का विश्लेषण प्रदर्शित करता है. इस प्रोटोकॉल भी बस मेजबान भ्रूण में इसी स्थानों के लिए दाता blastomeres जारी करके अन्य ऊतकों ?…
Acknowledgements
एनआईएच R01EY016099 अनुदान और अनुसंधान के लिए रोकें दृष्टिहीनता कैरियर विकास पुरस्कार: इस अध्ययन में एक राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) कोर अनुदान (5P30EY008098) और निम्नलिखित धन XW द्वारा समर्थित किया गया. हम Kira लेथरोप confocal इमेजिंग में सहायता के लिए धन्यवाद.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 5 ¾” Glass pipette | Fisher Scientific | 13-678-30 | ||
| Borosilicate Glass Capillary | WPI (World Precision Instruments, Inc.) | 1B100F-4 | ||
| FluoroDish | WPI | FD35 | ||
| Vertical Needle / pipette Puller | David Kopf Instruments | Model 720 | ||
| Micro Grinder | Marishige | EG-400 | ||
| Micro Forge | Marishige | MF-830 | ||
| Manual Microsyringe Pump | WPI | MMP | ||
| Forceps | Fine Science Tools | 11232-20 | ||
| Hydrofluoric Acid | Fisher Scientific | A147-1 | ||
| Penicillin- Streptomycin | GIBCO | 15140-122 | ||
| Agarose | RPI (Research Products International Corp.) | 9012-36-6 | ||
| Low melting agarose | Fisher Scientific | BP165-25 |
E3 egg water:
- 5 mM NaCl
- 0.17 mM KCl
- 0.33 mM CaCl2
- 0.33 mM MgSO4
- 0.1% methylene blue
References
- Zou, J., Lathrop, K., Sun, M., Wei, X. Intact RPE maintained by Nok is essential for retinal epithelial polarity and cellular patterning in zebrafish. Journal of Neuroscience. 28 (50), 13684-13695 (2008).
- Westerfield, M. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). THE ZEBRAFISH BOOK. , (2007).
- Ho, R. K., Kane, D. A. Cell-autonomous action of zebrafish spt-1 mutation in specific mesodermal precursors. Nature. 348, 728-730 (1990).
- Catalano, A., Raymond, P., Goldman, D., Wei, X. Zebrafish dou yan Mutation Causes Patterning Defects and Extensive Cell Death in the Retina. Developmental Dynamics. 236 (5), 1295-1236 (2007).
