Direkt Trakealtuber instillation av lösta ämnen i Mouse Lung
Summary
Intratrakeal instillationer leverera lösta ämnen direkt in i lungorna. Detta förfarande mål leverans av instillate i distala delar av lungorna, och är därför ofta ingår i studier som syftar till att studera alveolerna. Vi tillhandahåller en detaljerad överlevnad protokoll för att utföra intratrakeal instillationer hos möss.
Abstract
Intratrakeal instillationer leverera lösta ämnen direkt in i lungorna. Detta förfarande mål leverans av instillate i distala delar av lungorna, och är därför ofta ingår i studier som syftar till att studera alveolerna. Vi tillhandahåller en detaljerad överlevnad protokoll för att utföra intratrakeal instillationer hos möss. Med denna metod kan man rikta leverans av test lösta ämnen eller fasta ämnen (såsom lunga Therapeutics, tensider, virus och små oligonukleotider) i distala lungan. Luftrör instillationer kan vara att föredra metodik, över inandning protokoll som främst kan rikta de övre luftvägarna och eventuellt utsätta utredaren för potentiellt farliga ämnen. Dessutom, att använda luftrör instillation protokollet kan djur tillfrisknar helt från icke-invasiv förfarande. Detta möjliggör för att göra efterföljande fysiologiska mätningar på försöksdjur, eller ominstallation med samma djur. Mängden instillate förs in i lungan måste noggrant bestämmas och osmotiskt balanserad för att säkerställa djurens återhämtning. Normalt kan 30-75 mikroliter instillate volym föras in i musen lunga.
Protocol
Discussion
Intratrakeal instillationer har använts i flera olika studier för att utvärdera toxiciteten av test föreningar (6), framkalla alveolära lungskada (4, 7), byt tensider (8), samt ändra genuttryck via leverans av små oligonukleotider direkt i lunga (5). Vi är för närvarande undersöka användningen av ingjuta 1) fluorescerande redox-känsliga material i lungorna för att mäta oxidativ stress in vivo under normala och patofysiologiska förhållanden, samt 2) att ingjuta fluorescerande indikatorer med farmakologis…
Acknowledgements
Detta arbete stöddes av NIH K99 HL09222601 och S & R Stiftelsen Ryaji Uneo Award tilldelas MNH.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane | Webster Veterinary Sterling , MA | 14043-220-05 | ||
| Xylazine | Lloyd Laboratories Shenandoah, IA | New Animal Drug Application #139-236 | ||
| Ketamine | Bioniche Pharma Lake Forest, IL | 67457-001-10 | ||
| Nair | Available at drug stores | |||
| 1mL SubQ Syringe | BD Syringe Franklin Lakes, NJ | 309597 | 26 5/8 G | |
| 4-0 Nylon Suture | Ethicon San Lorenzo, Puerto Rico | 1894G.S30 |
References
- Driscoll, K. E., Costa, D. L., Hatch, G., Henderson, R., Oberdorster, G., Salem, H., Schlesinger, R. B. Intratracheal instillation as an exposure technique for the evaluation of respiratory tract toxicity: uses and limitations. Toxicol Sci. 55, 24-35 (2000).
- Helms, M. N., Jain, L., Self, J. L., Eaton, D. C. Redox regulation of epithelial sodium channels examined in alveolar type 1 and 2 cells patch-clamped in lung slice tissue. J Biol Chem. 283, 22875-22883 (2008).
- Helms, M. N., Self, J., Bao, H. F., Job, L. C., Jain, L., Eaton, D. C. Dopamine activates amiloride-sensitive sodium channels in alveolar type I cells in lung slice preparations. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 291, L610-L618 (2006).
- Iyer, S. S., Ramirez, A. M., Ritzenthaler, J. D., Torres-Gonzalez, E., Roser-Page, S., Mora, A. L., Brigham, K. L., Jones, D. P., Roman, J., Rojas, M. Oxidation of extracellular cysteine/cystine redox state in bleomycin-induced lung fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 296, L37-L45 (2009).
- Li, T., Folkesson, H. G. RNA interference for alpha-ENaC inhibits rat lung fluid absorption in vivo. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 290, L649-L660 (2006).
- Sager, T., Porter, D., Robinson, V., Lindsley, W., Schwegler-Berry, D., Castranova, V. An improved method to disperse nanoparticles for in vitro and in vivo investigation of toxicity. Nanotoxicol. 1, 118-129 (2007).
- Xu, J., Gonzalez, E. T., Iyer, S. S., Mac, V., Mora, A. L., Sutliff, R. L., Reed, A., Brigham, K. L., Kelly, P., Rojas, M. Use of senescence-accelerated mouse model in bleomycin-induced lung injury suggests that bone marrow-derived cells can alter the outcome of lung injury in aged mice. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 64, 731-739 (2009).
- Yeh, T. F., Lin, H. C., Chang, C. H., Wu, T. S., Su, B. H., Li, T. C., Pyati, S., Tsai, C. H. Early intratracheal instillation of budesonide using surfactant as a vehicle to prevent chronic lung disease in preterm infants: a pilot study. Pediatrics. 121, e1310-e1318 (2008).
