Dieser Artikel beschreibt die Verfahren der experimentellen Metastasierung Assay, mit denen die metastatische Potential von humanen Krebszelllinien zu bestimmen.
Abstract
Metastasierung ist die häufigste Todesursache bei Krebspatienten. Um zu verstehen, den Mechanismus der Metastasierung, war eine experimentelle Metastasierung Assay etabliert mit immundefizienten Mäusen. Dieser Artikel umreißt die Verfahren in diesem Test beteiligt, inklusive Probenvorbereitung, intravenöse Injektion, und Kultivieren von Zellen aus der Lunge Metastasen. Kurz gesagt, wurden einer vorher festgelegten Anzahl von menschlichen Krebszellen vorbereitet<em> In-vitro-</em> Und direkt in den Kreislauf von immundefizienten Mäusen durch ihren Schwanz Venen gespritzt. Eine kleine Anzahl von Zellen überleben die Turbulenzen an den Kreislauf an und wachsen als Metastasen in inneren Organen, wie Lunge. Die injizierten Mäuse sind nach einer gewissen Zeit seziert. Die Verteilung im Gewebe von Metastasen unter einem Binokular bestimmt. Die Anzahl der Metastasen in einem bestimmten Gewebe wird gezählt und es direkt korreliert mit dem metastatischen Fähigkeit der Krebszellen injiziert. Der entstandene Metastasen sind isoliert und kultiviert<em> In-vitro-</em> Als Zell-Linien, die oft zeigen verbesserte metastatischen Fähigkeiten als die Stammlinie, wenn wieder in immundefizienten Mäusen injiziert. Diese hoch metastatischen Derivate werden nützliche Tools zur Identifizierung von Genen oder molekularen Signalwege, die metastatischen Progression zu regulieren.
Protocol
1. Probenvorbereitung Wachsen Zellen auf ~ 70% konfluent in ihren spezifischen Medien mit Wachstumsfaktoren oder FBS (zB DMEM mit 10% FBS für MC-1-Zellen). Saugen Sie Medien aus Platte und vorsichtig waschen mehrmals mit 1 x PBS (8 g / l NaCl, 0,2 g / l KCl, 1,15 g / L Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / l KH 2 PO 4, pH 7,3). Absaugen PBS und 2 mL von 0,05% Trypsin in Versen (0,014 g / L von Phenolrot und 0,2 g / L EDTA-Na in 1 x PBS, pH 7,2). Schütt…
Discussion
Metastasierung ist die häufigste Todesursache bei Krebspatienten. Es umfasst vier wesentliche Schritte: Ablösung von Krebszellen aus ihrem primären loci, die Einfahrt in den Verkehr (intravasation), deren Ausfahrt aus dem Verkehr (Extravasation), und das Überleben und Wachstum in einem entfernten Organ. Metastase in der menschlichen gilt als ein langsamer Prozess und oft nach Jahren der Latenz manifestiert. Zur Untersuchung ihrer Progression rechtzeitig wurde die oben relativ schnell Versuchsansatz in immundefizient…
Acknowledgements
Dieses Protokoll wurde getestet und zunächst im Labor von Dr. Richard Hynes (MIT) optimiert. Die Finanzierung erfolgt durch die NYSTEM IDEA Award (für LX) und Ruth L. Kirschstein National Research Service Award (für LX) zur Verfügung gestellt.