تعيش خلية التصوير والتحليل الكمي من الخلايا الظهارية في الجنينية القيطم المورق</em
Summary
القيطم ظهائر الجنينية هي نموذج مثالي لنظام دراسة سلوكيات الخلية مثل التنمية وتغير شكل القطبية خلال التشكل الظهارة. ويتزايد الأنسجة التقليدية لعينات محددة يجري استكمالها التصوير الخلية الحية مبائر. هنا نظهر طرق لعزل الأنسجة الضفادع وتصور الخلايا الظهارية العيش والهيكل الخلوي وذلك باستخدام الخلايا الحية المجهري متحد البؤر.
Abstract
الخلايا الظهارية الجنينية بمثابة نموذج مثالي لدراسة التشكل حيث متعددة الخلايا الأنسجة تغيرات في الهندسة الخاصة بهم ، مثل التغيرات في المنطقة وارتفاع سطح الخلية الخلية ، وفيها خلايا الخضوع الانقسام والهجرة. وعلاوة على ذلك ، يمكن أيضا تنظيم الخلايا الظهارية الحركات التخلق في الأنسجة المجاورة<sup> 1</sup>. والطريقة التقليدية لدراسة الخلايا والأنسجة الطلائية تنطوي على تثبيت النسيجية والكيميائية وأساليب لتحديد مورفولوجية الخلية أو توطين بروتينات معينة من الفائدة. هذه الأساليب لا تزال مفيدة وتوفر "لقطات" من الأشكال الخلايا والأنسجة العمارة ، ومع ذلك ، لا يزال هناك الكثير يجب أن يفهم حول كيفية الحصول على خلايا محددة الأشكال ، وكيفية نقل أو البروتينات المختلفة لتوطين وظائف محددة ، وما هي الخلايا اتبع المسارات نحو النهائي لها مصير متباينة. ارتفاع القرار يعيش التصوير يكمل الأساليب التقليدية ، ويسمح أيضا مزيد من التحقيق المباشر في العمليات الحيوية الخلوية المشاركة في ، وتشكيل صيانة التشكل ، وصحائف متعددة الخلايا الظهارية. هنا نظهر الطرق التجريبية من العزلة من الأنسجة الحيوانية من قبعة<em> القيطم المورق</em> أجنة لتصوير مبائر من الخلايا الظهارية ونهج القياس البسيطة التي يمكن أن تزيد معا الدراسات الجزيئية والخلوية التشكل الظهارة.
Protocol
Discussion
قدمنا البروتوكولات التجريبية تستخدم بانتظام في المختبر لتغيير صورة الهيكل الخلوي حيوي في القشرة خلية قمية وتتأرجح أغشية الخلايا من الخلايا الظهارية في أجنة القيطم. ينبغي للمرء أن استخدام هذه البروتوكولات كنقطة انطلاق للتصوير يعيش من الأشكال الخلايا الظها?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (R01 – HD044750) ، منحة المهنة من مؤسسة العلوم الوطنية ، وبدعم من جمعية القلب الاميركية (البداية المنح التي تقدم للمساعدة). الكتاب أشكر أعضاء مختبر ديفيدسون : HY كيم ، M. Dassow فون وجيه تشو (للحصول على مساعدة ذوي المسؤوليات مختبر يوميا) ، وتشانغ لين لمساعدتها في مجال البيولوجيا الجزيئية وتوليف مرنا. نحن نعترف بجهود جميع مختبرات تجريبية من الضفدع (وخصوصا راي كيلر ودوغ لDeSimone) الذين ساهموا في جزء من هذا البروتوكول ، من خلال تطوير واختبار طرق مختلفة على مر السنين. نشكر ريتشارد هارلاند والينجفورد جون للهدايا من نوعها ، ذاكرة GFP والبلازميدات moesin – GFP على التوالي.
References
- Ninomiya, H., Winklbauer, R. Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension. Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).
- Kay, B. K., Peng, H. B. . Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).
- Cross, M. K., Powers, M. Obtaining eggs from Xenopus laevis females. J Vis Exp. , (2008).
- Cohen, S., Au, S., Pante, N. Microinjection of Xenopus laevis oocytes. J Vis Exp. , (2009).
- Nieuwkoop, P. D., Faber, J. . Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).
- Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis. Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).
- Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction. Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).
