Summary
I øjeblikket er fluorescein angiografi (FA) den foretrukne metode til identifikation af lækagemønstre i dyremodeller for choroidal neovaskularisering (CNV). FA giver dog ikke oplysninger om vaskulær morfologi. Denne protokol skitserer brugen af indocyaningrøn angiografi (ICGA) til at karakterisere forskellige læsionstyper af laserinduceret CNV i musemodeller.
Abstract
Aldersrelateret makuladegeneration (AMD) er en førende årsag til blindhed blandt ældre individer, og dens forekomst er hurtigt stigende på grund af den aldrende befolkning. Choroidal neovaskularisering (CNV) eller våd AMD, som tegner sig for 10% -20% af alle AMD-tilfælde, er ansvarlig for en alarmerende 80% -90% af AMD-relateret blindhed. Nuværende anti-VEGF-behandlinger viser suboptimale responser hos ca. 50% af patienterne. Resistens over for anti-VEGF-behandling hos CNV-patienter er ofte forbundet med arteriolær CNV, mens respondenter har tendens til at have kapillær CNV. Mens fluoresceinangiografi (FA) almindeligvis bruges til at vurdere lækagemønstre hos våde AMD-patienter og dyremodeller, giver den ikke oplysninger om CNV vaskulær morfologi (arteriolær CNV vs. kapillær CNV). Denne protokol introducerer brugen af indocyaningrøn angiografi (ICGA) til at karakterisere læsionstyper i laserinducerede CNV-musemodeller. Denne metode er afgørende for at undersøge mekanismer og behandlingsstrategier for anti-VEGF-resistens i våd AMD. Det anbefales at inkorporere ICGA sammen med FA til omfattende vurdering af både lækage og vaskulære egenskaber ved CNV i mekanistiske og terapeutiske undersøgelser.
Introduction
Aldersrelateret makuladegeneration (AMD) er en udbredt tilstand, der fører til alvorligt synstab hos ældre personer1. Alene i USA forventes antallet af AMD-patienter at fordobles og nå næsten 22 millioner i 2050 sammenlignet med de nuværende 11 millioner. Globalt forventes det anslåede antal AMD-tilfælde at nå svimlende 288 millioner i 20402.
Choroidal neovaskularisering (CNV), også kendt som "våd" eller neovaskulær AMD, kan have ødelæggende virkninger på synet på grund af dannelsen af unormale blodkar under den centrale nethinden. Dette fører til blødning, retinal ekssudation og betydeligt synstab. Indførelsen af antivaskulære endotelvækstfaktorbehandlinger (VEGF), der er målrettet mod ekstracellulær VEGF, har revolutioneret CNV-behandling. På trods af disse fremskridt udviser op til 50% af patienterne suboptimale reaktioner på disse terapier med løbende sygdomsaktivitet såsom væskeakkumulering og uløste eller nye blødninger 3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14.
Kliniske undersøgelser har vist, at anti-VEGF-resistens hos CNV-patienter ofte svarer til tilstedeværelsen af arteriolær CNV, karakteriseret ved store kaliberforgreningsarterioler, vaskulære sløjfer og anastomotiske forbindelser9. Gentagen anti-VEGF-behandling kan bidrage til karabnormalisering, udvikling af arteriolær CNV og i sidste ende resistens over for anti-VEGF-terapier14,15. I tilfælde af arteriolær CNV skyldes vedvarende væskelækage sandsynligvis øget ekssudation forårsaget af utilstrækkeligt dannede tætte kryds ved arteriovenøse anastomotiske sløjfer, især under betingelser med høj blodgennemstrømning9. Omvendt har personer, der reagerer godt på anti-VEGF-behandling, tendens til at udvise kapillær CNV.
I vores studier med dyremodeller har vi vist, at laserinduceret CNV hos ældre mus udvikler arteriolær CNV og viser resistens over for anti-VEGF-behandling16,17. Omvendt fører laserinduceret CNV hos yngre mus til udvikling af kapillær CNV og høj respons over for anti-VEGF-behandling. Det er således afgørende at skelne mellem CNV vaskulære typer til både mekanistiske og terapeutiske undersøgelser.
I kliniske indstillinger klassificeres CNV almindeligvis baseret på fluorescein angiografi (FA) lækagemønstre (f.eks. Type 1, Type 2), som bruger fluoresceinfarvestof til at spore ekssudation og identificere områder med patologisk lækage. I AMD-forskning undersøges CNV overvejende ved hjælp af FA i dyremodeller. FA afslører imidlertid ikke CNV's vaskulære morfologi. Desuden fanger FA kun billeder i det synlige lysspektrum og kan ikke visualisere den koroidale vaskulatur under retinale pigmentepitel (RPE). I modsætning hertil letter indocyaningrøn (ICG), som udviser stærk affinitet for plasmaproteiner, fremherskende intravaskulær retention og muliggør visualisering af vaskulær struktur og blodgennemstrømning9. Ved at udnytte ICG's nær-infrarøde fluorescensegenskab bliver det muligt at afbilde retinale og choroidale pigmenter ved hjælp af ICG-angiografi (ICGA). I denne sammenhæng præsenteres en protokol, der kombinerer FA og ICGA for at undersøge lækage og vaskulær morfologi af laserinduceret choroidal neovaskularisering (CNV) hos unge og gamle mus, hvor kapillær og arteriolær CNV observeres.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyreforsøgene udført i denne undersøgelse modtog godkendelse fra Institutional Animal Care and Use Committees (IACUC) ved Baylor College of Medicine. Alle procedurer blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne beskrevet i Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Statement for the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Research. Unge (7-9 uger) og gamle (12-16 måneder) C57BL/6J han- og hunmus blev anvendt til nærværende undersøgelse. Dyrene blev hentet fra en kommerciel kilde (se materialetabel).
1. Forberedelse af billeddannelsessystemet
- Placer en varmepude på billedplatformen (se materialetabellen) for at sikre, at musens kropstemperatur opretholdes under billeddannelsen. Aktivér varmepuden, og indstil temperaturen til 35 °C.
- Fjern støvdækslet, og tænd for laserscanningsoftalmoskopet. Placer et 55° objektiv på maskinen.
- Opsæt billedbehandlingssoftwaren (se materialetabellen), og indtast vigtige oplysninger, herunder genotype, køn, alder osv. Når billedbehandlingssessionen begynder, skal du vælge IR (infrarød kanal) til optagelse af ICGA-billeder.
2. Tilberedning af dyr forud for ICGA og FA
- Vej musen for at bestemme mængden af anæstesi (ketamin/xylazin 70-100/2,5-10 mg/kg, se materialetabellen).
BEMÆRK: Optimering af doseringen er afgørende, da den metaboliske profil varierer mellem forskellige musestammer. Det er vigtigt at bestemme den passende dosis for at undgå, at musen vågner op, før billeddannelsen afsluttes, eller risikoen for overdosering og potentiel dyredødelighed. - Brug en 1 ml steril sprøjte med en 30-32 G nål til at levere anæstesi ved intraperitoneal injektion. Klem forsigtigt en af musens poter for at kontrollere, om musen er tilstrækkeligt bedøvet. Hvis dyret udviser nogen reaktion eller bevægelse, er det tilrådeligt at vente på yderligere tid, før du fortsætter til næste trin. Dette gør det muligt for dyret at bosætte sig og sikrer optimale betingelser for de efterfølgende procedurer.
- Administrer 1% tropicamid oftalmiske opløsningsdråber for at udvide begge musens øjne. Vent mindst 30 sek., før du bruger 0,5% proparacainhydrochloriddråber (se materialetabellen) på begge øjne for at reducere øjenbevægelser og blinke. Følg dette op med smøremiddel øjengel dråber.
BEMÆRK: Gennem hele anæstesiens varighed er det vigtigt at løse problemet med ekstrem tørhed i musens øjne, hvilket kan føre til uklarhed af hornhinden. Denne uigennemsigtighed gør efterfølgende billeddannelse udfordrende på grund af hindret synlighed. For at forhindre dette er det afgørende at anvende glidecreme øjengeldråber kontinuerligt for at holde musens øjne fugtede. - Placer musen på en varmevandspude.
BEMÆRK: Mus har et højt overfladeareal til volumenforhold, hvilket resulterer i øget varmetab til miljøet. Når det kombineres med temperaturfaldet induceret af anæstesi, kan dette udgøre en betydelig risiko for musen, hvilket potentielt kan føre til død på grund af hypotermi. Det er afgørende at tage de nødvendige forholdsregler for at forhindre hypotermi og sikre musens trivsel under proceduren. - Forbered en 1:1 volumenblanding af 2 mg/ml ICG og 20 mg/ml fluoresceinfarvestof (se materialetabel). Administrer 250 μL af blandingen gennem intraperitoneal injektion ved hjælp af en 1 ml sprøjte og en 32 G kanyle.
- Indsæt nålen i nederste venstre kvadrant af musens mave nær bagbenene i en vinkel parallelt med musens hud for at undgå perforering af organer.
- Træk forsigtigt stemplet ud og kontroller, at der ikke er kommet blod ind i sprøjtehætten. Fortsæt med at injicere farvestoffet langsomt og støt og opretholde et ensartet tempo.
BEMÆRK: ICG-farvestoffet skal filtreres med et 0,22 μm sprøjtefilter før brug.
3. ICGA og FA
- Placer musen på billedplatformens varmepude for at starte billeddannelsen.
- Placer musens krop i en vinkel på 45 grader i forhold til kameraet, og drej hovedet lidt nedad. Dette gør det muligt for synsnerven at være i midten af kameraets fokus.
- Brug en vatpind til at tørre øjet forsigtigt for at fjerne laget af smøremiddel, øjendråber eller geler på øjet, der først afbildes. Sørg for at påføre smøremiddelgeldråberne umiddelbart efter afslutningen af billeddannelsesproceduren.
BEMÆRK: Det anbefales ikke at forlade øjet uden smøring i mere end 1 minut under anæstesi. - Flyt kameraet mod musens øje. Vælg FA-kanalen fra anskaffelsesmodulet. Den luminescens, der udsendes fra FA-kanalen, kan bruges til at placere sig i midten af musehornhinden for hurtigere placering.
- Placer musens hoved på en sådan måde, at synsnerven er centreret på skærmen, så du undgår behovet for at vippe laserscanningens oftalmoskop i en vinkel. Foretag mindre justeringer af musens hovedposition for at opnå den ønskede justering.
- På anskaffelsesmodulet skal du vælge ICGA-kanalen. Sørg for, at laserintensiteten er indstillet til 100 %, og vælg indstillingen 55° for at matche det relevante objektiv. Dette sikrer optimale indstillinger for laserscanning oftalmoskop.
BEMÆRK: For at forhindre overmætning kan det være nødvendigt at bruge en lavere laserintensitet, typisk omkring 25% -50%, når du afbilder det tidlige stadium. Justering af laserintensiteten i dette område kan hjælpe med at tage klare og nøjagtige billeder uden at forårsage overmætning. - Når øjet optager hele skærmen på billedbehandlingssoftwaren, skal du foretage justeringer af følsomheds- og fokusindstillingerne for at få det klareste billede af CNV-membranen.
- Drej den runde sorte knap på anskaffelsesmodulet for at justere billedets følsomhed.
- Drej knappen på oftalmoskopet for at justere fokus. Det optimale fokus til visualisering af retinal vaskulatur ved hjælp af FA ligger typisk inden for området 35-45 D (dioptre). På den anden side er det ideelle fokus til visualisering af choroid ved hjælp af ICGA generelt mellem 10-15 D.
BEMÆRK: På grund af de forskellige størrelser af CNV-membran kan det være nødvendigt at justere fokus i 10-30 D for at opnå optimal billeddannelse af den vaskulære morfologi.
- Når fokus og følsomhed er justeret for at opnå det bedst mulige billede, skal du trykke på den runde sorte knap på anskaffelsesmodulet for at normalisere billedet. Når normaliseringen er fuldført (alle billeder taget), skal du klikke på anskaffelsesknappen på berøringsskærmpanelet for at gemme billedet. Det kan være nødvendigt at flytte kameraet rundt for at afbilde CNV fra forskellige vinkler. Musen kan også orienteres i forskellige positioner for at give det bedste billede af CNV-læsionen.
BEMÆRK: Det kan være nødvendigt at justere fokus eller placering af laserscanningens oftalmoskop, når man ser vaskulaturen længere væk fra synsnerven. - Skift tilbage til FA-kanalen ved hjælp af anskaffelsesmodulet. Udfør de samme trin, der er angivet i trin 3.6-3.7, for at justere følsomheden og fokus for hvert billede for at fange lækagen af CNV-læsionen.
BEMÆRK: Sørg for, at den korrekte følsomhed er valgt for at undgå overmætning af CNV-lækagen og kunstigt øge lækageområdet. - Forestil dig den "tidlige fase" af ICGA og FA 3-4 minutter efter injektion.
BEMÆRK: Den "tidlige fase" er det tidspunkt, hvor den choroidale vaskulatur kan ses klart og tydeligt. I den midterste fase, som typisk forekommer mellem 4-8 min, er retinale og koroidale kar meget mere falmede og diffuse. Når den sene fase (>8-10 min) sætter ind, bliver både de koroidale og retinale kar umærkelige. Hyperfluorescerende CNV-læsioner udviser imidlertid maksimal kontrast mod den formindskede baggrund. Disse nævnte tidspunkter er variable og afhænger af koncentrationen og mængden af ICG-farvestof, der injiceres. En større mængde ICG-farvestof har tendens til at øge tidslinjen for hver fase og give mere forskellige kar. En fase bør defineres baseret på de nøglefunktioner, der er anført ovenfor, snarere end en absolut tid. - Når alle billeder er erhvervet, skal du anvende et gelsmøremiddel eller salve på musens øje og omhyggeligt overvåge musen på varmepuden til genopretning. Det tager normalt 1,5 time for musen at komme sig helt.
- Placer musene tilbage i deres bure og det udpegede holdeområde, når de er kommet sig helt efter anæstesien og er vågne.
- Før du lukker billedbehandlingssystemet og laseren, skal du eksportere billederne som enten TIFF- eller JPEG-filer til efterfølgende analyse.
4. RPE/choroid fladmonteret og farvning
- Fastgør øjnene i 4% paraformaldehyd natten over. Vask øjnene med PBS tre gange. Fjern linsen og hornhinden.
- Inkuber øjnene i blokerende opløsning (10% bovin serumalbumin, 0,6% Triton X-100 i PBS) i 1 time ved stuetemperatur. Gentag PBS-vask tre gange.
- Inkuber øjnene med isolectin GS-IB4 Alexa-mel 568 konjugat og anti-α-glat muskulatur actin antistof (se tabel over materialer) natten over i blokeringsopløsningen.
- Vask tre gange med PBS. Inkuber prøverne med et Alexa Fluor 488 ged anti-kanin sekundært antistof (se materialetabel) i 2 timer ved stuetemperatur.
- Udfør 4 radiale snit fra kanten til ækvator. Fjern forsigtigt nethinden17.
BEMÆRK: Der skal udvises forsigtighed for at sikre, at den neovaskulære membran ikke ved et uheld løsnes. - Monter den fladmonterede choroid på et glasglas. Visualiser CNV ved hjælp af konfokal mikroskopi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Efter protokollen blev ICGA og FA udført på laserinduceret CNV hos unge (7-9 uger) og gamle (12-16 måneder) C57BL/6J mus. FA giver information om placeringen og lækagen af CNV-læsionerne (figur 1, venstre paneler), mens ICGA afslører den vaskulære morfologi af CNV-læsionerne (figur 1, højre paneler). Hos unge mus dominerer kapillær CNV CNV-læsionerne. I modsætning hertil udviser gamle mus arteriolær CNV kendetegnet ved store kaliberbeholdere, vaskulære sløjfer og anastomotiske forbindelser. Både unge og gamle mus viser tydelig synlighed af retinal vaskulatur i FA (figur 1, venstre paneler). I ICGA-billederne af unge mus er retinal vaskulatur ikke synlig, og de koroidale kar ser falmede ud, hvilket indikerer den midterste fase af ICGA med fokus på choroidal vaskulatur. I ICGA-billederne af gamle mus kan delvis retinal vaskulatur observeres, mens de koroidale kar ser falmede ud, hvilket tyder på mellemfasen med fokus mellem nethinden og choroid på grund af den større størrelse af arteriolær CNV hos gamle mus. Arteriolær CNV i gamle mus udviser større CNV-størrelse (figur 2) og signifikant mere lækage sammenlignet med kapillær CNV hos unge mus. Immunfarvning med et anti-glat muskelaktinantistof mærker i vid udstrækning CNV-vaskulaturen hos gamle mus, hvilket bekræfter arteriolær morfologi (figur 3). I modsætning hertil observeres minimal farvning med α-glat muskelactin i vaskulaturen på læsionsstedet hos unge mus, i overensstemmelse med kapillærmorfologi.
Figur 1: Sammenligning af FA- og ICGA-billeder, der viser laserinduceret CNV hos unge og gamle mus. FA-billederne viser lækagen af CNV-læsioner, mens ICGA giver visualisering af den vaskulære morfologi. Vægtstænger: 200 μm. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Kvantificering af CNV-læsionsstørrelse hos unge og gamle mus baseret på ICGA-billeder. CNV-områder blev målt, med i alt 26 og 14 laserpletter analyseret i henholdsvis unge og gamle mus. Fejlbjælker repræsenterer gennemsnit ± SD. Statistisk analyse blev udført ved hjælp af en uparret t-test. P < 0,0001. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Repræsentative billeder af CNV-læsioner hos unge og gamle mus, co-mærket med Alexa 568 isolectin og anti-α-glat muskelaktinantistof på RPE / choroid flat-mounts. Den røde farve repræsenterer Alexa 568 isolectin, mens den grønne farve repræsenterer α-glat muskelaktin (SMA). Skalabjælker: 100 μm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne undersøgelse viste brugen af indocyaningrøn angiografi (ICGA) til at identificere den vaskulære morfologi af arteriolær og kapillær choroidal neovaskularisering (CNV) i musemodeller med laserinduceret CNV. De hæmoglobinbundne og infrarøde lysegenskaber ved indocyaningrønt (ICG) farvestof muliggjorde påvisning af CNV-morfologi, hvilket er udfordrende at opnå ved hjælp af fluoresceinangiografi (FA), den nuværende metode, der anvendes af forskersamfundet.
Det første kritiske trin i protokollen er at sikre, at farvestoffet injiceres i det intraperitoneale hulrum uden at trænge ind i organer. Korrekt injektionsplacering i nederste venstre kvadrant med en lille vinkel mellem hud og skråning, samtidig med at man undgår indsættelse af hele nålen, giver mulighed for forbedret optagelse af indocyaninfarvestof. Injektion af farvestoffet i et organ kan resultere i langsommere optagelse og potentielle komplikationer såsom laceration af abdominale organer, indre blødninger eller infektion. Et andet vigtigt aspekt af proceduren er at centrere synsnerven, før du erhverver billeder for at se hele øjets diameter. Dette kræver overlapning af luminescensen, der udsendes af FA-kanalen og museøjet, mens du er opmærksom på billedet på computerskærmen. For at fastgøre længdevinklen er det bedst at vippe musehovedet direkte på plads i stedet for at justere maskinen op eller ned, hvilket sikrer, at hele synsfeltet er fanget.
Tidligere forskning har vist, at brugen af ketamin/xylazinbedøvelsesmidler kan forårsage uklarhed af hornhinden18,19. Dette kan minimeres ved at reducere mængden af xylazin20. Derudover er det vigtigt at opretholde ensartet hornhindefugtighed for at undgå dannelse af grå stær. Dette kan opnås ved hjælp af smørende øjendråber eller gel. Disse faktorer bliver særligt vigtige med øget billeddannelsesfrekvens og aldring af dyremodellen, da vedvarende hornhindeskader påvirker klarheden af ICGA-billeder. I længere billeddannelsesperioder kan proceduren modificeres ved at anvende en polymethylmethacrylatkontaktlinse over en gelbaseret bufferopløsning for at forhindre dannelse af grå stær21.
Injektionsmetoden er en anden afgørende komponent. Mens denne undersøgelse fokuserer på intraperitoneal (IP) injektion, kan proceduren udføres med små ændringer ved hjælp af intravenøs (IV) injektion, specifikt haleveneinjektion. Intraperitoneal injektion blev valgt på grund af dens lette præstation, især med pigmenterede mus, og dens pålidelighed under proceduren. Dette er en vigtig overvejelse, da kvantitative forsøg med CNV kræver effektiv behandling af et stort antal mus. Uanset injektionsmetoden kan de angiografiske egenskaber ved CNV stadig erhverves på grund af dens store størrelse og placering mellem choroid og nethinden, når man karakteriserer forskellige typer choroidale læsioner i en dyremodel. Dette adskiller sig imidlertid for polypoid choroidal vaskulopati (PCV), en anden undertype af våd AMD, som primært er placeret inde i choroid og kræver IV-ICGA tidsforløbsbilleddannelse for nøjagtig diagnose22.
En begrænsning ved kombineret FA / ICGA er den øgede variabilitet ved optagelse af forskellige faser af CNV-ekssudation. De optimale tidspunkter for tidlige og sene stadier stemmer ikke altid overens for ideelle ICGA- og FA-billeder, hvilket kræver ekstra tid til at justere fokus mellem de to tilstande for hvert øje. Dette aspekt forstærkes af IP-injektionsproceduren, som introducerer mere variation i timingen af de tre faser og kræver længere billedbehandlingstid sammenlignet med haleveneinjektion22. Disse faktorer har imidlertid minimal indflydelse på påvisning af CNV vaskulær morfologi, og fordelene ved kombineret FA / ICGA opvejer disse begrænsninger.
Nylige undersøgelser viser, at forskellige typer CNV-læsioner, såsom kapillær eller arteriolær CNV, reagerer forskelligt på nuværende anti-VEGF-terapier 9,16,17. Derfor er bestemmelse af den vaskulære morfologi af CNV-læsioner afgørende. Den nuværende valgte metode, FA, giver imidlertid ikke disse væsentlige oplysninger. Det anbefales at bruge ICGA i forskningssamfundet til billeddannelse af neovaskulære AMD-modeller. Denne undersøgelse viste, at ICGA og FA bekvemt kan udføres sammen for at vurdere både lækage og vaskulære træk ved CNV til mekanistiske og terapeutiske undersøgelser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af tilskud fra BrightFocus Foundation, Retina Research Foundation, Mullen Foundation og Sarah Campbell Blaffer Endowment in Ophthalmology til YF, NIH-kernetilskud 2P30EY002520 til Baylor College of Medicine og et ubegrænset tilskud til Institut for Oftalmologi ved Baylor College of Medicine fra Research to Prevent Blindness.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 32-G Insulin Syringe | MHC Medical Products | NDC 08496-3015-01 | |
| Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit secondary antibody | Invitrogen | A11008 | |
| Anti-α smooth muscle Actin antibody | Abcam | ab5694 | |
| Bovine Serum Albumin | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-2323 | |
| C57BL/6J mice (7-9 weeks) | The Jackson Laboratory | Strain #:000664 | |
| Fluorescein Sodium Salt | Sigma-Aldrich | MFCD00167039 | |
| Gaymar T Pump Heat Therapy System | Gaymar | TP-500 | Water circulation heat pump for mouse recovery after imaging |
| GenTeal Gel | Genteal | NDC 58768-791-15 | Clear lubricant eye gel |
| GS-IB4 Alexa-Flour 568 conjugate | Invitrogen | I21412 | |
| Heidelberg Eye Explorerer | Heidelberg Engineering, Germany | HEYEX2 | |
| Indocyanine Green | Pfaultz & Bauer | I01250 | |
| Ketamine | Vedco Inc. | NDC 50989-996-06 | |
| Paraformaldehyde | Acros Organics | 416785000 | |
| Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution (0.5%) | Sandoz | NDC 61314-016-01 | |
| Spectralis Multi-Modality Imaging System | Heidelberg Engineering, Germany | SPECTRALIS HRA+OCT | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | X100-1L | |
| Tropicamide ophthalmic solution (1%) | Bausch & Lomb | NDC 24208-585-64 | For dilation of pupils |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | NADA 139-236 |
References
- Fleckenstein, M., et al.
- Wong, W. L., et al. Global prevalence of age-related macular degeneration and disease burden projection for 2020 and 2040: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Global Health. 2 (2), e106-e116 (2014).
- Maguire, M. G., et al. Five-Year outcomes with anti-vascular endothelial growth factor treatment of neovascular age-related macular degeneration: the comparison of age-related macular degeneration treatments trials. Ophthalmology. 123 (8), 1751-1761 (2016).
- Yang, S., Zhao, J., Sun, X. Resistance to anti-VEGF therapy in neovascular age-related macular degeneration: a comprehensive review. Drug Design, Development and Therapy. 10, 1857-1867 (2016).
- Ehlken, C., Jungmann, S., Böhringer, D., Agostini, H. T., Junker, B., Pielen, A. Switch of anti-VEGF agents is an option for nonresponders in the treatment of AMD. Eye. 28 (5), London, England. 538-545 (2014).
- Heier, J. S., et al. Intravitreal aflibercept (VEGF trap-eye) in wet age-related macular degeneration. Ophthalmology. 119 (12), 2537-2548 (2012).
- Rofagha, S., Bhisitkul, R. B., Boyer, D. S., Sadda, S. R., Zhang, K. SEVEN-UP Study Group Seven-year outcomes in ranibizumab-treated patients in ANCHOR, MARINA, and HORIZON: a multicenter cohort study (SEVEN-UP). Ophthalmology. 120 (11), 2292-2299 (2013).
- Krebs, I., Glittenberg, C., Ansari-Shahrezaei, S., Hagen, S., Steiner, I., Binder, S. Non-responders to treatment with antagonists of vascular endothelial growth factor in age-related macular degeneration. British Journal of Ophthalmology. 97 (11), 1443-1446 (2013).
- Mettu, P. S., Allingham, M. J., Cousins, S. W. Incomplete response to Anti-VEGF therapy in neovascular AMD: Exploring disease mechanisms and therapeutic opportunities. Progress in Retinal and Eye Research. 82, 100906 (2021).
- Otsuji, T., et al. Initial non-responders to ranibizumab in the treatment of age-related macular degeneration (AMD). Clinical Ophthalmology (Auckland, N.Z). 7, 1487-1490 (2013).
- Cobos, E., et al. Association between CFH, CFB, ARMS2, SERPINF1, VEGFR1 and VEGF polymorphisms and anatomical and functional response to ranibizumab treatment in neovascular age-related macular degeneration. Acta Ophthalmologica. 96 (2), e201-e212 (2018).
- Kitchens, J. W., et al. A pharmacogenetics study to predict outcome in patients receiving anti-VEGF therapy in age related macular degeneration. Clinical Ophthalmology (Auckland, N.Z.). 7, 1987-1993 (2013).
- Rosenfeld, P. J., Shapiro, H., Tuomi, L., Webster, M., Elledge, J., Blodi, B. Characteristics of patients losing vision after 2 Years of monthly dosing in the phase III Ranibizumab clinical trials. Ophthalmology. 118 (3), 523-530 (2011).
- Spaide, R. F. Optical coherence tomography angiography signs of vascular abnormalization with antiangiogenic therapy for choroidal neovascularization. American Journal of Ophthalmology. 160 (1), 6-16 (2015).
- Lumbroso, B., Rispoli, M., Savastano, M. C., Jia, Y., Tan, O., Huang, D. Optical coherence tomography angiography study of choroidal neovascularization early response after treatment. Developments in Ophthalmology. 56, 77-85 (2016).
- Zhu, L., et al. Combination of apolipoprotein-A-I/apolipoprotein-A-I binding protein and anti-VEGF treatment overcomes anti-VEGF resistance in choroidal neovascularization in mice. Communications Biology. 3 (1), 386 (2020).
- Zhang, Z., Shen, M. M., Fu, Y. Combination of AIBP, apoA-I, and Aflibercept overcomes anti-VEGF resistance in neovascular AMD by inhibiting arteriolar choroidal neovascularization. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 63 (12), 2 (2022).
- Koehn, D., Meyer, K. J., Syed, N. A., Anderson, M. G.
- Li, X. -T., Qin, Y., Zhao, J. -Y., Zhang, J. -S. Acute lens opacity induced by different kinds of anesthetic drugs in mice. International Journal of Ophthalmology. 12 (6), 904-908 (2019).
- Zhou, T. E., et al. Preventing corneal calcification associated with xylazine for longitudinal optical coherence tomography in young rodents. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (1), 461-469 (2017).
- Ikeda, W., Nakatani, T., Uemura, A. Cataract-preventing contact lens for in vivo imaging of mouse retina. BioTechniques. 65 (2), 101-104 (2018).
- Kumar, S., Berriochoa, Z., Jones, A. D., Fu, Y. Detecting abnormalities in choroidal vasculature in a mouse model of age-related macular degeneration by time-course indocyanine green angiography. Journal of Visualized Experiments. 84, e51061 (2014).
