To-foton laserindusert nevral skade: En metode for å observere Axon degenerasjon og regenerering i Drosophila larver

Abstract

Kilde: Li, D., et al. A Drosophila In Vivo Injury Model for å studere nevroregistrering i perifert og sentralnervesystem. J. Vis. Utt. (2018).

Denne videoen beskriver to-foton laser ablasjon av axoner i en Drosophila melanogaster larve og et eksempel protokoll for å indusere skade og bilde skadestedet.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Li et al.,A Drosophila In Vivo Injury Model for Studying Neuroregeneration in the Peripheral and Central Nervous System, J. Vis. Exp. (2018). 1. To-foton skade og confocal imaging Oppsett av mikroskopMERK: Et konfokalt laserskanningsmikroskop med en to-foton laser ble brukt til dette eksperimentet, men andre systemer med tilsvarende oppsett vil også være tilstrekkelig. Den to-foton laser…

Representative Results

Figur 1: Da neuron axon regenerering i periferien viser klasse spesifisitet. (A og B) Skjematisk tegning som viser larvens posisjon. (C) Skjematisk tegning av klasse III da nevroner. (D) Axons av klassen III da nevroner ddaF, merket med 19-12-Gal4, UAS-CD4-tdGFP, repo-Gal80/+, unnlater å regrow. (E) Skjematisk tegning av klasse IV da nevroner. (F…

Materials

Diethyl ether, ACS reagent, anhydrous	Acros Organics	AC615080010
Halocarbon 27 Oil	Genesee Scientific	59-133
Propionic Acid	J.T.Baker	U33007
Cover Glasses: Rectangles	Fisher Scientific	12-544-D	50 mm X 22 mm
Zeiss LSM 880 laser scanning microscope	Zeiss
Zen software	Zeiss
Chameleon Ultra II	Coherent