Injection de mouches drosophiles adultes : une méthode de livraison de composés ou d’étiquettes

Abstract

Source: Nazario-Toole, A. E., Wu, L. P. Évaluer la réponse immunitaire cellulaire de la mouche des fruits, Drosophila melanogaster, à l’aide d’un essai de phagocytose In Vivo. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit comment effectuer une injection de mouches adultes vivantes et comprend un protocole d’exemple dans lequel les particules étiquetées et le bleu trypan sont injectés dans les abdomens de mouche pour apaiser la phagocytose.

Protocol

Ce protocole est un extrait de Nazario-Toole et Wu, Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay, J. Vis. Exp. (2019). 1. Préparer les particules de fluorescéine à l’injection Reconstituer 10 mg de particules bactériennes disponibles dans le commerce et tuées par la chaleur étiquetées avec de la fluorescéine (voir tableau des matériaux)à une concentration d…

Materials

5430-10 PicoNozzle Kit	World Precision Instruments	5430-10	Holder for 1.0mm pipette
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Fluorescein conjugate	Invitrogen	E2861	Killed E. coli labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~494/~518 nm)
Needle Pipette Puller	David Kopf Instruments	Model 725
Pneumatic PicoPump PV820	World Precision Instruments	SYS-PV820	The World Precision Instruments Pneumatic PicoPump PV820 uses differential pressures to hold liquid in the glass needle between injections. The user manually controls short bursts of gas pressure to expel the liquid – allowing delivery of sub-nanoliter volumes. The amount of liquid delivered depends on two main variables – the size of the glass needle opening and the amount of time injection pressure is applied. set the instrument to 100 ms "TIMED" mode.
Thin Wall Glass Capillaries	World Precision Instruments	TW100F-3	Needles for injection. OD = 1.0 mm
Trypan Blue Solution (0.4%)	Sigma	T8154	Used to quench extracellular fluorescence of Fluorescein, Alexa Fluor, or Texas Red labeled particles.