Инъекция взрослых мух дрозофилы: метод соединения или доставки этикетки

Abstract

Источник: Назарио-Тул, A. E., Wu, L. P. Оценка клеточного иммунного ответа плодовой мухи, Drosophila меланогастер, Использование In Vivo Phagocytosis Assay. J. Vis. Exp. (2019).

Это видео описывает, как выполнить инъекцию живых взрослых мух и включает в себя пример протокола, в котором помеченные частицы и трипан синий вводятся в мухи брюшной полости для анализа фагоцитоза.

Protocol

Этот протокол является выдержкой из Назарио-Тул и Ву, Оценка клеточной иммунной реакции плодовой мухи, Drosophila меланогастер, Использование In Vivo Phagocytosis Assay, J. Vis. Exp. (2019). 1. Подготовка частиц флуорессейна для инъекций Восстановить 10 мг коммерчески доступны?…

Materials

5430-10 PicoNozzle Kit	World Precision Instruments	5430-10	Holder for 1.0mm pipette
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Fluorescein conjugate	Invitrogen	E2861	Killed E. coli labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~494/~518 nm)
Needle Pipette Puller	David Kopf Instruments	Model 725
Pneumatic PicoPump PV820	World Precision Instruments	SYS-PV820	The World Precision Instruments Pneumatic PicoPump PV820 uses differential pressures to hold liquid in the glass needle between injections. The user manually controls short bursts of gas pressure to expel the liquid – allowing delivery of sub-nanoliter volumes. The amount of liquid delivered depends on two main variables – the size of the glass needle opening and the amount of time injection pressure is applied. set the instrument to 100 ms "TIMED" mode.
Thin Wall Glass Capillaries	World Precision Instruments	TW100F-3	Needles for injection. OD = 1.0 mm
Trypan Blue Solution (0.4%)	Sigma	T8154	Used to quench extracellular fluorescence of Fluorescein, Alexa Fluor, or Texas Red labeled particles.