Summary
אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE) היא מודל בעל חיים של טרשת נפוצה (MS), אשר חולק עם המחלה האנושית תגובה אוטואימונית הומורלית חזקה. כאן, אנו מדווחים על פרוטוקול ELISA פשוט וגמיש לכימות נוגדנים עצמיים בסרום של עכברים מחוסנים EAE.
Abstract
אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE) היא מודל מחלה המשחזר את ההפרעה האוטואימונית טרשת נפוצה (MS) ברמה היסטופתולוגית ומולקולרית. EAE מושרה על ידי חיסון חיות ניסוי באמצעות הזרקה תת עורית של פפטידי מיאלין קצרים יחד עם אדג'ובנטים ספציפיים כדי להגביר את התגובה החיסונית. בדומה למקבילו האנושי, עכברי EAE מפתחים נגעים דה-מיאלינטינג, חדירת תאי מערכת החיסון למערכת העצבים המרכזית (CNS), הפעלת גליה ופגיעה עצבית. גוף עקבי של ראיות תומך גם בתפקיד מכניסטי לתפקוד לקוי של תאי B באטיולוגיה של טרשת נפוצה ו- EAE. תאי B יכולים לשמש כתאים מציגי אנטיגן, כמו גם מקור עיקרי של ציטוקינים מעודדי דלקת ונוגדנים עצמיים. ב- EAE, נוגדנים נוצרים כנגד פפטידים של המיאלין ששימשו לגרימת המחלה. נוגדנים עצמיים כאלה הוכחו כמתווכים אובדן מיאלין או הפעלה מחדש של תאי T פתוגניים למערכת העצבים המרכזית. מאמר זה מתאר פרוטוקול יעיל מבוסס ELISA לכימות נוגדנים עצמיים בסרום של עכברי C57BL/6J שחוסנו בפפטיד מיאלין אוליגודנדרוציטים גליקופרוטאין 35-55 (MOG35-55). השיטה המוצעת משמשת כלי רב עוצמה לחקר הספציפיות והעוצמה של התגובה ההומורלית החריגה בהקשר של דמיאלינציה אוטואימונית.
Introduction
טרשת נפוצה (MS) היא מחלה אוטואימונית כרונית של מערכת העצבים המרכזית (CNS) המאופיינת בחדירה מוקדית של תאי מערכת החיסון לפרנכימה במוח, פירוק נדן המיאלין העוטף אקסונים, הפעלת גליה ואובדן עצבי1. בנוסף לתפקיד המבוסס היטב של תאי T פתוגניים, קווי ראיות רבים הדגישו את מעורבותם של תאי B בתיווך התגובה האוטואימונית נגד מערכת העצבים המרכזית. תאי B עוברים התרחבות שבטית במוח הטרשת הנפוצה ונוגדנים כנגד מרכיבי המיאלין התגלו בתוך נגעים מיוצרים 2,3. ההפעלה הסלקטיבית של תאי B היקפיים עם תחילת המחלה תועדה לאחרונה, דבר המצביע על תפקיד משוער לתא חיסוני זה גם בהתחלת מחלה4. ההצלחה של טיפולים מדללי תאי B כגון נוגדנים חד-שבטיים נגד CD20 מאששת עוד יותר את הקשר המכניסטי בין תפקוד חריג של תאי B לבין דמיאלינציה אוטואימונית 5,6. מנקודת מבט מולקולרית, תאי B יכולים לתרום למחלה באמצעות הצגת אנטיגן עצמי, הפרשת ציטוקינים פרו-דלקתיים וייצור נוגדנים אוטו-ריאקטיביים.
מודלים רבים של בעלי חיים פותחו כדי לשחזר תכונות ספציפיות של פנוטיפ הטרשת הנפוצה המורכב. ביניהם, אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE) היא פרדיגמת in vivo הנפוצה ביותר ומסתמכת על חיסון של חיות ניסוי עם פפטידים קצרים הנגזרים מחלבוני מיאלין כגון גליקופרוטאין אוליגודנדרוציטים במיאלין (MOG) וחלבון בסיסי מיאלין (MBP)7. בעלי חיים מחוסנים של EAE מפתחים פתולוגיה דה-מיאלינציה הדומה לטרשת נפוצה בהיבטים רבים, כולל תגובה הומורלית חזקה נגד הפפטיד אנצפליטוגני8. מסיבה זו, מחקרי EAE סייעו לנתח את תפקודם של תאי B ונוגדנים עצמיים בהקשר של מחלה. לדוגמה, הוכח כי נוגדנים ספציפיים ל-MOG שבודדו מחולי טרשת נפוצה יכולים להחמיר את המהלך הקליני במודלים9 של EAE. יש לציין כי שאריות הפרולין במיקום 42 ב-MOG האנושי הוכחו כקריטיות לקביעת פתוגניות הנוגדנים העצמיים10. לאחרונה, נוגדנים עצמיים ספציפיים ל-MOG נמצאו כמקדמים מחלות לא רק על ידי תיווך אובדן מיאלין, אלא גם על ידי הגברת ההפעלה מחדש של תאי T אוטו-ריאקטיביים בתוך מערכת העצבים המרכזית11.
בהתחשב בחשיבות של תגובות נוגדנים באוטואימוניות CNS, מאמר זה מציג פרוטוקול מבוסס ELISA למדידה יעילה של רמות הנוגדנים האוטו-תגובתיים בסרום בעכברי C57BL/6J EAE שחוסנו בפפטיד MOG35-55. בחלק הראשון של הפרוטוקול תתואר השיטה לאיסוף סרום באמצעות ניקוב תוך לבבי. לאחר מכן, יפורטו הנהלים להקמת בדיקת ELISA ורכישת הנתונים. לבסוף, יידונו ניתוח נתונים ופרשנותם.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל ההליכים המערבים עכברים בוצעו בהתאם להנחיות הניסוי שאושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת מזרח קרוליינה (IACUC). במחקר זה נעשה שימוש בנקבות עכברי Wildtype C57BL/6J בגילאי 8-10 שבועות. בעלי החיים התקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים). EAE הושרה בעקבות דוחות שפורסמו בעבר 12,13,14.
1. קולקציית סרום
- הרדימו את עכבר הניסוי על ידי חנקCO2 או מנת יתר של איזופלורן בנקודת הזמן הנדרשת (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי מוסדות) לאחר השראת EAE באמצעות חיסון MOG35-55.
הערה: המספר הכולל של עכברים ונקודות זמן לאיסוף נסיוב יכול להשתנות בהתאם לניסוי הספציפי. - לאחר היעדר סימנים חיוניים הוא אישר על ידי צביטת הבוהן או הזנב, מניחים את העכבר במצב שכיבה גבי על מגש דיסקציה ומדביקים את הגפיים במקומו עם סיכות או קלטת. כוון את גוף העכבר למקור אור LED (ראה טבלת חומרים) כדי להאיר את בית החזה של החיה.
- רססו את פרוות העכבר באתנול 70% ובצעו חתך בקו האמצע של 3-4 ס"מ לאורך הבטן מהאגן ועד לקסיפואיד באמצעות מספריים לכריתה, תוך הקפדה להימנע מכל איברים וכלי דם עיקריים (איור 1A-C). כדי להקל על ההליך, השתמש במלקחיים כדי לתפוס את העור על תהליך xiphoid.
- חתכו דרך הסרעפת לרוחב ואז חתכו את כלוב הצלעות קדמית בשני הקצוות הרוחביים באמצעות מספריים קפיציים, ועצרו לפני שתגיעו לעצם החזה בקו האמצע (איור 1D). קפלו את דש הצלעות שנוצר מעל ראש העכבר כדי לחשוף את הלב (איור 1E).
הערה: יש להימנע מחיתוך עצם החזה מכיוון שהדבר יפגע בעורקי החזה הראשיים הסמוכים לעצם ויקטין את נפח הדם שניתן לאסוף. - הכניסו מחט של 25 גרם שמחוברת למזרק של 1 מ"ל לחדר השמאלי ואספו את הדם על-ידי משיכה עדינה לאחור של הבוכנה (איור 1F). כדי להקל על ניקוב המחט, סד בעדינות את הלב נגד זוג מלקחיים.
הערה: אם הדם אינו מופיע מיד לתוך המזרק, המחט צריכה להיות מסובבת לאט, זווית אחרת יש לבדוק. עם זאת, יש לעשות מאמצים למקם את המחט כראוי בניסיון הראשון כדי למנוע יצירת חורים מיותרים בלב שבהם הדם יכול לדלוף החוצה. - מעבירים את הדם לצינור סטרילי של 1.5 מ"ל ומאפשרים לו להיקרש במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. הסר את הקריש על ידי צנטריפוגה ב 2000 × גרם למשך 20 דקות ב 4 ° C. אספו את הסופרנטנט, המייצג את מקטע הסרום, ואחסנו אליציטוטים חד-פעמיים בצינורות קריוגניים בטמפרטורה של -80°C לבדיקות עתידיות.
2. בדיקת אליסה
- יש להשהות מחדש את הפפטיד MOG35-55 שעבר ליופיליזציה (ראו טבלת חומרים) במים כדי לקבל מלאי של 10 מ"ג/מ"ל. לפני תחילת הניסוי, יש לדלל את הציר ל-10 מיקרוגרם/מ"ל בחיץ ציפוי (ראו טבלת חומרים) ופיפטה 100 מיקרוליטר/באר של התמיסה הסופית לצלחת בת 96 בארות. אטמו את הצלחת בסרט הדבקה כדי למנוע אידוי ודגרו על הצלחת למשך הלילה בטמפרטורה של 4°C.
הערה: יש לחשב לפחות 2 בארות עבור כל מדגם ולכלול גם 2 בארות נוספות עבור בקרה ריקה. - במקביל, צפו את אותו מספר בארות ב-100 מיקרוליטר/באר של אלבומין בסרום בקר (BSA) המומס בחיץ ציפוי בריכוז של 10 מיקרוגרם/מ"ל. בארות נוספות אלה ישמשו כבקרות רקע.
הערה: מומלץ לצפות עם BSA את בארות הבקרה מכיוון שלמאגרי הציפוי והחסימה יש הרכבים שונים. שים לב כי פפטידים אנצפליטוגניים אחרים (כגון PLP139-151 או MBP84-104) יכולים לשמש כאנטיגנים לא רלוונטיים כחלופה ל- BSA. - ביום שאחרי, שטפו את הצלחת 3 פעמים עם 200 μL/well של מלח חיץ פוספט בתוספת 0.05% Tween 20 (PBS-T). לאחר מכן, יש להוסיף 100 μL/well של תמיסת חסימה העשויה מ-3% BSA ב-PBS (ללא Tween 20) ולדגור על הצלחת אטומה למשך שעה אחת ב-37°C בתנור הכלאה.
- שטפו את הצלחת 3 פעמים עם 200 μL/well של PBS-T. יש לדלל כל דגימת סרום ביחס 1:100 בתמיסת חסימה ולהוסיף 100 μL/well הן לבארות מצופות MOG35-55 והן לבארות מצופות BSA. הוסף את אותו נפח של פתרון חסימה לבארות המיועדות ריקות. דוגרים על הצלחת אטומה למשך שעתיים בטמפרטורת החדר, תוך רעידות קבועות (250 סל"ד).
- שטפו את הצלחת 3 פעמים עם 200 μL/well של PBS-T. לדלל את הנוגדן המשני המצומד HRP (1:2000, ראה טבלת חומרים) בתמיסה העשויה 0.2% BSA ב- PBS-T ולהוסיף 100 μL / באר לכל הבארות. יש לדגור על הצלחת אטומה למשך שעה בטמפרטורת החדר, תוך רעידות קבועות (250 סל"ד).
- שטפו את הצלחת 3 פעמים עם 200 μL/well של PBS-T. הוסף 100 μL / באר של מצע 3,3',5,5' tetramethylbenzidine (TMB) (ראה טבלת חומרים) לכל הבארות ודגר בחושך במשך 1-5 דקות, מעקב אחר התפתחות של צבע כחול.
- עצור את התגובה על ידי הוספת 100 μL/well של תמיסת עצירה (ראה טבלת חומרים) ומדידת הצפיפות האופטית (OD) בכל באר באמצעות קורא לוחות המוגדר באורך גל של 450 ננומטר.
הערה: מצע TMB צריך להיות מאוזן בטמפרטורת החדר במשך 30-60 דקות לפני הוספתו לבארות.
- עצור את התגובה על ידי הוספת 100 μL/well של תמיסת עצירה (ראה טבלת חומרים) ומדידת הצפיפות האופטית (OD) בכל באר באמצעות קורא לוחות המוגדר באורך גל של 450 ננומטר.
3. ניתוח נתונים
- אכלס גיליון אלקטרוני של Excel בערכי OD שנקראו מהצלחת. ממוצע ערכי OD המתקבלים מבארות כפולות (הן MOG35-55 והן BSA מצופה) עבור כל דגימה.
- עבור כל דגימה, הפחת את הערך הממוצע של הבארות מצופות BSA מזה של בארות מצופות MOG35-55. ערכי הרקע המתוקנים שיתקבלו יהיו פרופורציונליים לריכוז נוגדנים נגד MOG35-55 בדגימות הסרום השונות.
הערה: בארות ריקות אמורות לגרום לערכים מתוקנים סביב 0. - החל מבחן סטטיסטי לא פרמטרי כגון מבחן Mann-Whitney U כדי להשוות את ערכי OD ממוצעים בין שני תנאי ניסוי. כלול לפחות 3 דגימות בלתי תלויות עבור כל מצב.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
כדי להדגים את החוסן של בדיקת ELISA הנוכחית, השיטה נבדקה על דגימות סרום שבודדו מעוקבה של עכברות C57BL/6J לאחר 20 יום לאחר החיסון (dpi) עם 100 מיקרוגרם של פפטיד MOG35-55 באדג'ובנט מלא של פרוינד (CFA) בעקבות פרוטוקול אינדוקציה מאומת של EAE 12,13,14. החיות קיבלו גם 400 ננוגרם של רעלן שעלת ביום 0 ו-2. דגימות סרום מבעלי חיים מחוסנים מדומים עם הכל אך ללא הפפטיד שימשו כבקרות שליליות. כל עכברי EAE פיתחו את סימני המחלה הראשונים בין 11-14 dpi והגיעו לציון ממוצע של 2.6 ± 0.6 (שגיאת תקן, SE) בסולם 0-6 (0, ללא סימנים; 1, טונוס זנב מופחת; 2, monoparesis קל או paraparesis; 3, paraparesis חמור; 4, שיתוק; 5, quadriparesis; ו 6, מוות או מוות)12. כצפוי, דגימות EAE הציגו ערכי OD גבוהים משמעותית בהשוואה לדגימות ביקורת (איור 2). נתונים אלה מאשרים את נוכחותה של תגובת אימונוגלובולין IgG חזקה נגד פפטיד MOG בשיא המחלה.
איור 1: הליך ניקוב לב. (A-E) תמונות מייצגות של הליך בית החזה כדי לגשת ללב בעכברים בוגרים. (F) תמונה מייצגת של ההליך הנכון להחדרת מחט לחדר השמאלי של לב העכבר. מבנים אנטומיים רלוונטיים מסומנים בכל פאנל כדי להקל על הדיסקציה. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2: נוגדן עצמי פפטידי MOG ELISA. רמות סרום של אימונוגלובולינים מסוג IgG נגד MOG35-55 נבדקו ב-EAE ובעכברים מדומים לאחר 20 יום לאחר החיסון (dpi) באמצעות פרוטוקול ELISA המדווח. ערכי OD גבוהים יותר באופן עקבי זוהו בדגימות EAE בהשוואה לבקרות. הנתונים מוצגים כאמצעים ± SE (N = 3 לקבוצה). ההבדלים בין הקבוצות הוערכו על ידי מבחן Mann-Whitney U חד-זנבי, *P ≤-0.05. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
כאן, דווח על פרוטוקול פשוט ויעיל מבוסס ELISA כדי לכמת במדויק את התגובה ההומורלית במודל חייתי רלוונטי של פתולוגיה של טרשת נפוצה. שיטה זו שימשה לאחרונה לתיאור התפקיד החדש של חלבון אטקסין-1 בשליטה על רמות הנוגדנים העצמיים בסרום בפרדיגמת MOG35-55/C57BL6J EAE12. בהקשר זה, יש לקחת בחשבון מספר גורמים, על מנת להשיג תוצאות עקביות ובעלות משמעות ביולוגית בשיטה זו.
ראשית, חשוב לאסוף דגימות סרום באיכות גבוהה ולהימנע מהמוליזה. המוגלובין ורכיבים תוך-תאיים אחרים המשתחררים מתאי דם אדומים בדגימות בעלות המוליזה כבדה עלולים להפריע לתגובת האנטיגן-נוגדנים ולמדידת הצבע היחסי בבדיקת ELISA. כדי למנוע המוליזה, עדיף להימנע מלחץ שלילי גבוה במזרק במהלך איסוף הדם כמו זה יכול לגרום אריתרוציטים לקרוע.
שנית, חשוב לדלל את דגימות הסרום כדי לקבל ערכי OD בחלק הליניארי של עקומת הספיגה. גורם הדילול המומלץ שלנו (1:100) כויל על הישות של פתולוגיית EAE המושרה בזני העכבר שלנו. בהתחשב ברמה הפנימית של ההטרוגניות של מודל in vivo זה, מומלץ מאוד לבצע ניסויי טיטרציה ראשוניים כדי לזהות את גורם הדילול האידיאלי עבור פתולוגיית EAE הספציפית שנבדקה. כמו כן, ניתן להתאים את זמני הדגירה עם מצע TMB כדי למנוע את הרוויה של האות הכרומוגן ולשמור על ערכי OD בטווח 0-2.
שלישית, ערכי OD המתוקנים המתקבלים בפרוטוקול זה תואמים לניתוח כמותי למחצה של טיטרים בסרום נוגדנים עצמיים בין תנאי ניסוי שונים או למחקרים קינטיים לאורך התקדמות המחלה. אם יש צורך בכימות מוחלט של רמות הנוגדנים העצמיים, יש ליישם עקומת כיול בעיצוב ELISA. נוגדנים מרובים נגד פפטיד MOG זמינים באופן מסחרי וניתן להשתמש בהם כתקנים אמינים לחישוב הריכוז של נוגדנים ספציפיים ל- MOG בסרום של עכברי EAE. כדי ללכוד השפעות בסדרי גודל שונים, מומלץ לכלול מגוון רחב של דילולים עבור הנוגדן המכייל (החל מריכוזי pg/mL ועד לריכוזי μg/mL).
לבסוף, פרוטוקול זה גמיש ביותר וניתן להתאים אותו בקלות לצרכי מחקר שונים. לדוגמה, ניתן לשנות את הפפטיד אנצפליטוגני המצופה כדי להעריך את תגובת הנוגדנים העצמיים בפרדיגמות EAE אחרות. יתר על כן, ניתן להשתמש בנוגדנים משניים שונים כדי למדוד את הרמות של קבוצות אימונוגלובולינים שונות. לשם כך, פרוטוקול זה הוכיח בהצלחה כי אטקסין-1 שולט הן במחלקות IgG והן ב- IgM של נוגדנים ספציפיים לפפטיד MOG12. לבסוף, ניתן לדמיין שימוש אפשרי לאיתור נוגדנים עצמיים בדמם של חולי טרשת נפוצה. עם זאת, קיימים הבדלים משמעותיים בין מחלות EAE וטרשת נפוצה. בעוד הראשון מושרה באופן מלאכותי באמצעות הגברת התגובה החיסונית נגד אנטיגן עצמי מוגדר היטב עם אדג'ובנטים חזקים, האחרון מתעורר באופן ספונטני ולא זוהו עדיין אוטואנטיגנים חד משמעיים. עדויות עדכניות מצביעות על מעורבות אפשרית של חיקוי מולקולרי עם חלבונים נגיפיים15. לפיכך, תמיד יש לשקול אזהרות בתרגום ישיר של תצפיות שנאספו במודל בעלי חיים זה למחלה האנושית.
לסיכום, הפרוטוקול הנוכחי מייצג חלופה קלה ונוחה לערכות ELISA מסחריות וניתן לשלב אותו ביעילות עם שיטות אחרות כגון בדיקות מבוססות תאים (CBAs) להערכה מדויקת של שחרור נוגדנים עצמיים בהקשר של דמיאלינציה אוטואימונית.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים מצהירים כי אין אינטרסים מתחרים.
Acknowledgments
מחקר זה נתמך על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (R03NS131908) ומשרד ההגנה באמצעות תוכנית המחקר לטרשת נפוצה תחת פרס מס 'W81XWH-22-1-0517. דעות, פרשנויות, מסקנות והמלצות הן של המחבר ואינן בהכרח מאושרות על ידי משרד ההגנה. מחקר זה נתמך גם על ידי קרנות סטארט-אפ של אוניברסיטת מזרח קרוליינה.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 mL syringes | BD Biosciences | 309628 | |
| 1.5 mL microcentrifuge tubes | Fisher | 05-408-129 | |
| 25 G needles | BD Biosciences | 305122 | |
| 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine (TMB) substrate | Thermo Fisher | N301 | Store at 4 °C |
| Adhesive seals | Thermo Fisher | AB0558 | |
| Bovine serum albumin (BSA) | Sigma | A7906 | Store at 4 °C |
| C57BL/6J female mice | The Jackson Laboratory | 000664 | Animals between 8-10 weeks of age should be used for EAE experiments |
| Cryogenic tubes | Fisher | 10-500-25 | |
| Dissection tray | Fisher | S111022 | |
| Dissector scissors | Fine Science Tools | 14082-09 | |
| ELISA coating buffer | BioLegend | 421701 | Store at 4°C |
| Excel software | Microsoft | Analysis spreadsheet | |
| Forceps | Fine Science Tools | 11152-10 | |
| Goat Anti-Mouse IgG, Human ads-HRP | SouthernBiotech | 1030-05 | Store at 4 °C |
| LED light source | Fisher | AMPSILED21 | |
| Microplate reader | Fisher | 14-377-575 | |
| Molecular biology grade water | Corning | 46-000-Cl | |
| Mouse MOG35-55 peptide | EZBiolab | cp7203 | Store at -80 °C |
| Multichannel pipette | Axygen | AP-12-200-P | |
| Noyes spring scissors | Fine Science Tools | 15011-12 | |
| Nunc MaxiSorp 96-well plates | BioLegend | 423501 | |
| Orbital shaker | Fisher | 88-861-023 | |
| Oven | VWR | 445-0024 | |
| Phosphate buffer saline (PBS) | Thermo Fisher | 14190144 | |
| Refrigerated tabletop centrifuge | Thermo Fisher | 75002441 | |
| Stop solution | Thermo Fisher | N600 | |
| Tween 20 | Bio-Rad | 1706531 |
References
- Reich, D. S., Lucchinetti, C. F., Calabresi, P. A.
- Baranzini, S. E., et al. B cell repertoire diversity and clonal expansion in multiple sclerosis brain lesions. J Immunol. 163 (9), 5133-5144 (1999).
- Genain, C. P., Cannella, B., Hauser, S. L., Raine, C. S. Identification of autoantibodies associated with myelin damage in multiple sclerosis. Nat Med. 5 (2), 170-175 (1999).
- Ma, Q., et al. Specific hypomethylation programs underpin b cell activation in early multiple sclerosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (51), e2111920118 (2021).
- Hauser, S. L., et al. Ocrelizumab versus interferon beta-1a in relapsing multiple sclerosis. N Engl J Med. 376 (3), 221-234 (2017).
- Montalban, X., et al. Ocrelizumab versus placebo in primary progressive multiple sclerosis. N Engl J Med. 376 (3), 209-220 (2017).
- Didonna, A. Preclinical models of multiple sclerosis: Advantages and limitations towards better therapies. Curr Med Chem. 23 (14), 1442-1459 (2016).
- Steinman, L., Zamvil, S. S. How to successfully apply animal studies in experimental allergic encephalomyelitis to research on multiple sclerosis. Ann Neurol. 60 (1), 12-21 (2006).
- Khare, P., et al. Myelin oligodendrocyte glycoprotein-specific antibodies from multiple sclerosis patients exacerbate disease in a humanized mouse model. J Autoimmun. 86, 104-115 (2018).
- Marta, C. B., Oliver, A. R., Sweet, R. A., Pfeiffer, S. E., Ruddle, N. H. Pathogenic myelin oligodendrocyte glycoprotein antibodies recognize glycosylated epitopes and perturb oligodendrocyte physiology. Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (39), 13992-13997 (2005).
- Flach, A. C., et al. Autoantibody-boosted t-cell reactivation in the target organ triggers manifestation of autoimmune cns disease. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (12), 3323-3328 (2016).
- Didonna, A., et al. Ataxin-1 regulates b cell function and the severity of autoimmune experimental encephalomyelitis. Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (38), 23742-23750 (2020).
- Didonna, A., et al. Sex-specific tau methylation patterns and synaptic transcriptional alterations are associated with neural vulnerability during chronic neuroinflammation. J Autoimmun. 101, 56-69 (2019).
- Ma, Q., Matsunaga, A., Ho, B., Oksenberg, J. R., Didonna, A. Oligodendrocyte-specific argonaute profiling identifies micrornas associated with experimental autoimmune encephalomyelitis. J Neuroinflammation. 17 (1), 297 (2020).
- Lanz, T. V., et al. Clonally expanded b cells in multiple sclerosis bind ebv ebna1 and glialcam. Nature. 603 (7900), 321-327 (2022).
