Vierweg Olfactometer-test: een methode om odorant-cued-reacties in Drosophila te beoordelen

Abstract

Bron: Lin, C.C., et al. Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer. J.Vis. Exp. (2016).

Fruitvliegen hebben een complex reuksysteem, kunnen honderden geurstoffen onderscheiden en hun reukvermogen gebruiken om gedragsbeslissingen te sturen. Deze video beschrijft de vierweg olfactometertest, een methode om reukgedragsreacties bij vliegen te bestuderen. De uitgelichte protocolclip laat zien hoe om te gaan met testvliegen en wat kritieke stappen zijn tijdens het uitvoeren van de test.

Protocol

Dit protocol is een fragment uit Lin et al., Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer, J. Vis. Exp. (2016).

1. Gedragsreacties op aantrekkelijke en afstotende geurstoffen

1. Schakel de temperatuurregelaar in en stel deze in op 25 °C.
2. Sluit de geurkamers (controle- en testgeurstoffen) aan door de slang in de uitlaat van de geurkamer en op de push-to-connect-fitting op de gedragsbox te plaatsen.
3. Controleer het debiet in elk kwadrant met behulp van de luchtstroommeter om er zeker van te zijn dat de regel- en geurige luchtstroomen gelijk ....

Results

Figuur 1: Voorbeeldgegevens die zijn gegenereerd met behulp van een olfactorische test met vier velden. (A) Schematisch van de vier-veld arena. (B) Neutrale reacties worden waargenomen wanneer alle vier de kwadranten alleen droge luchtperfusie bevatten. (C) Aantrekkingsreacties op een verdunning van 6,25% appelciderazijn doordrenkt uit het linker bovenste kwadrant. (

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
<strong>Air delivery system</strong>			<strong>(Quantity needed)</strong>
<em><strong>Tubing and connectors</strong></em>
Thermoplastic NPT(F) Manifolds	Cole-Parmer, IL, USA	R-31522-31	1
Hex reducing nipple (1/4MNPT->1/8MNPT)	McMaster-Carr, IL, USA	5232T314	1
Tubing (ID:1/8)	McMaster-Carr, IL, USA	5108K43	50 Ft
Tubing (ID:1/16)	McMaster-Carr, IL, USA	52355K41	100 Ft
Barbed tube fittings	McMaster-Carr, IL, USA	5117K71	1 pack
Push-to-connect tube fittings	McMaster-Carr, IL, USA	5779K102	4
Barbed Tube Fittings (1/4MNPT->1/8BF)	McMaster-Carr, IL, USA	5463K439	1 pack (10)
Barbed Tube Fittings (1/8MNPT->1/8BF)	McMaster-Carr, IL, USA	5463K438	2 pack (10)
Barbed Tube Fittings (1/8MNPT->1/16BF)	McMaster-Carr, IL, USA	5463K4	2 pack (10)
Barbed Tube Fittings (1/4MNPT->1/4BF)	McMaster-Carr, IL, USA	5670K84	1
Hex head plug	McMaster-Carr, IL, USA	48335K152	1
<em><strong>Air pressure regulator, air filter and flowmeters</strong></em>			<strong>(Quantity needed)</strong>
Labatory gas drying unit	W A HAMMOND DRIERITE CO LTD, OH, USA	Model: L68-NP-303; stock #26840	1
Multitube frames for 150 mm flowtubes	Cole-Parmer, IL, USA	R03215-30	1
Multitube frames for 150 mm flowtubes	Cole-Parmer, IL, USA	R03215-76	1
150 mm flowtubes	Cole-Parmer, IL, USA	R-03217-15	9
Valve Cartridge	Cole-Parmer, IL, USA	R-03218-72	9
Precision Air regulator	McMaster-Carr, IL, USA	6162K13	1
Soleniod valves	Automate Scientific, Berkeley, CA	02-10i	4
Solenoid valve controller	ValveLink 8.2, Automate Scientific, Berkeley, CA	18-Jan	1
Electronic flow meter	Honeywell	AWM3100V	1
DAQ (NI USB-6009, National Instruments) and a	National Instruments	NI USB-6009	1
Power supply	Extech Instruments	382200	1
Odor chambers
Polypropylene Wide Mouth jar 2 oz; 60 ml	Nalgene	562118-0002	At least 5 are required per experiment, but a separate chamber is required for each dillution of each odorant. Available at Container Store, part #635114)
Glass odor chamber, 0.25 oz	Sunburst Bottle	LB4B	At least 5 are required per experiment
"In" valve for odor chamber	Smart Products, Inc., CA, USA	214224PB-0011S000-4074	1 of these parts is used per odor chamber but they need to be replaced frequently
"Out" valve for odor chamber	Smart Products, Inc., CA, USA	224214PB-0011S000-4074	1 of these parts is used per odor chamber but they need to be replaced frequently
O ring	RT Dygert International, MN, USA	AS568-029 Buna-N O-R	1 pack (100)
<em><strong>Fly arena, camera and behavior boxes</strong></em>			<strong>(Quantity needed)</strong>
Behavior and camera box material	Interstate plastics, CA, USA	ABS black extruded (<a href="https://www.interstateplastics.com/Abs-Black-Extruded-Sheet-ABSBE~~ST.php" target="_blank">https://www.interstateplastics.com/Abs-Black-Extruded-Sheet-ABSBE~~ST.php</a>)	1803 sq inch
Teflon for fly arena and odor chamber inserts, 3/8" thick, 12" x 12"	McMaster-Carr, IL, USA	8545K27	1
Glass plates, 1/8" Thick, 9" x 9"	McMaster-Carr, IL, USA	8476K191	2
Dual action thermoelectric controller	WAtronix Inc, CA, USA	DA12V-K-0	1
IR LED array	Advanced Illumination, Rochester, VT, USA	AL4554-88024, PS24-TL	2 LED arrays and one power supply
Air conditioner Unit	Melcor Store	MAA280T-12	1
<em><strong>Imaging system</strong></em>			<strong>(Quantity needed)</strong>
Cosmicar/Pentax C21211TH (12.5 mm F/1.4) C-mount Lens	B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA	PEC21211 KP	1
CCXC-12P05N Interconnect Cable	B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA	SOCCXC12P05N	1
DC-700 Camera Adapter	B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA	SODC700	1
B+W 40,5 093 IR filter	B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA	65-072442	1
TiFFEN 40.5 mm Circular polarizer	Amazon		1
IR Videocamera	Industrial Vision Source, FL, USA	Sony XC-EI50 (SY-XC-E150)	1
USB video converter	The Imagingsource, NC, USA	DFG/USB2-It	1
iFlySpy2 (fly tracking software)	Julian Brown, Stanford, Calfornia: julianrbrown@gmail.com	iFlySpy2	1
IC Capture software	The Imagingsource, NC, USA	(<a href="https://www.theimagingsource.com/" target="_blank">http://www.theimagingsource.com/</a>)
<strong>Miscellaneous</strong>			<strong>(Quantity needed)</strong>
Dremel rotary tool	Dremel, Racine, WI, USA	Dremel 8000-03	1
Diamond-coated drill bits for glass cutting	Available from various suppliers; MSC industrial Supply Co, Melville, NY	90606328	1