Disseksjon av midgut fra en voksen flue: En metode for å isolere fordøyelseskanalen

Abstract

Kilde: Tauc, H.M., et al. Isolere tarmstammeceller fra voksne Drosophila Midguts av FACS for å studere stamcelleadferd under aldring. J. Vis. Utt. (2014).

I denne videoen fremhever vi en disseksjon av den voksne Drosophila-tarmen og samlingen av midguts egnet for encellet dissosiasjon og FACS for å isolere tarmstammeceller.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Tauc et al.,Isolere tarmstammeceller fra voksen drosophila midguts av FACS for å studere stamcelleadferd under aldring, J. Vis. Exp. (2014). MERK: Hvis denne protokollen brukes for første gang til å isolere ISCer ved hjelp av FAC-sortering, er følgende kontroller obligatoriske for først å angi FACS-parameterne riktig: Dissosierte celler fra villtype (f.eks. w1118</…

Materials

Forceps: Dumont, Inox Biologie #5	Fine Science Tools	11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh)	Sefar	3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap	Corning	352235
Polymax 1040	Heidolph	543-42210-00
Albumin from bovine serum (BSA)	Sigma	A4503-50G
0.5% Trypsin-EDTA	Invitrogen	15400-054	Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly.
SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry	Life Technologies	S34857
RNAlater Stabilization Solution	Life Technologies	AM7023	Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation
FACSAria II cell sorter	Becton Dickinson		Turn on one hour prior to sorting