Alimentação FITC-Dextran: Um método para quantificar a permeabilidade intestinal em C. elegans

Abstract

Fonte: Le, T. A. N., et al. Medindo os efeitos de bactérias e produtos químicos na permeabilidade intestinal de caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019). 

Este vídeo introduz um método para visualizar e medir a integridade do lúmen intestinal C. elegans alimentando vermes fitc rotulados dextran.  O protocolo de exemplo mostra o ensaio feito com vermes tratados com 3,3′-diindolylmetano (DIM) e alimentados por patógenos.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Le et al, Medindo os Efeitos de Bactérias e Produtos Químicos sobre a Permeabilidade Intestinal de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). Preparação de placas de NGM para testar os efeitos de um produto químico (DIM) na P…

Representative Results

Figura 1: O efeito do DIM na permeabilidade intestinal de C. elegans alimentado P. aeruginosa. Imagens de microscopia de vermes de (A) E. coli OP50 sem alimentação FITC-dextran, (B) E. coli com alimentação FITC-dextran, (C) P. aeruginosa</em…

Materials

3,3’-diindolylmethane	Sigma	D9568
90×15 mm Petri dishes	SPL Life Sciences, South Korea	10090
Bactor Agar	Beckton Dickinson	REF. 214010
Formaldehyde solution	Sigma	F1635
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Cholesterol	Sigma	C3045
Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene	Corning Incorporated	REF. 3631
Dimethyl sulfoxide	Sigma	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Fluorescein isothiocyanate – dextran	Sigma	FD10S
Harmony software	PerkinElmer		verson 3.5
Magnesium sulfate heptahydrate	Fisher Bioreagents	BP2213-1
Fluoromount aqueous mounting medium	Sigma	F4680
Operetta CLS High-Content Analysis System	PerkinElmer	HH16000000
Peptone	Merck	EMD 1.07213.1000
Pseudomonas aeruginosa PA01	Korean Collection for Type Culture	KCTC NO. 1637
Sodium Chloride	Fisher Bioreagents	BP358-1
Stereo Microscope	Nikon, Japan	SMZ800N