I Vivo Elektroporation: En stedsspecifik metode til at transfekte zebrafisk

In This Article

Abstract

Kilde: Durovic, T., et al. Elektroporation metode til In Vivo Levering af Plasmid DNA i voksen zebrafisk Telencephalon. J. Vis. Exp. (2019).

Denne video beskriver in vivo elektroporation, som er en teknik til DNA-levering i ependymogliale celler hos voksne zebrafisk.

Protocol

1. Elektroporation

Fjern fisken fra injektionsopsætningen, mens du stadig holder den i svampen.
Fordyb indersiden af spidsen af elektroderne i ultralydsgelen.
Dæk fisken telencephalon med en lille mængde ultralyd gel.
Placer fiskehovedet mellem elektroderne, og placer den positive elektrode på den ventrale side af fiskens hoved og den negative elektrode på dorsalsiden (Figur 1C), mens fiskens krop stadig er i svampen. Dette indstiller retningen af strømmen af den strøm, der er nødvendig for at elektroporate ependymoglia placeret i subventricular zone.
Tryk elektroderne forsigtigt og præcist mod telencephalon (Figur 1 C). Administrere strømmen med fodpedalen. Hold elektroderne på plads, indtil alle fem impulser er færdige.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

figure-results-1
Figur 1: Skematisk repræsentation af koronade del af den everted zebrafisk telencephalon. (A) Ordning med en koronarsektion af zebrafisktelncephalon, der fremhæver placeringen af ependymogliale celler, som er forende ventrikulær overflade og opbygning af ventral ventrikelvæggen. Dorsal ependymal lag bygger bro mellem de to halvkugler og dækker hjertekammer (V), der ligger i mellem to cellelag: ependymogli...