वीवो में इलेक्ट्रोपाउशन: ज़ेब्राफिश को ट्रांसफेक्ट करने के लिए एक साइट-विशिष्ट विधि

Abstract

स्रोत: ड्यूरोविक, टी, एट अल। वयस्क जेब्राफिश टेलेंसेफलन में प्लाज्मिड डीएनए के वीवो डिलीवरी के लिए इलेक्ट्रोपॉनेशन विधि। जे विस एक्सप्रेस (2019)।

यह वीडियो वीवो इलेक्ट्रोपॉरेशन में वर्णन करता है, जो वयस्क जेब्राफिश में एपेंडीमोग्लियाल कोशिकाओं में डीएनए डिलीवरी की एक तकनीक है ।

Protocol

1. इलेक्ट्रोपाउशन

1. अभी भी स्पंज में पकड़ करते हुए इंजेक्शन सेट-अप से मछली निकालें।
2. अल्ट्रासाउंड जेल में इलेक्ट्रोड की नोक के भीतरी हिस्से को विसर्जित करें।
3. मछली टेलेंसेफेलन को थोड़ी मात्रा में अल्ट्रासाउंड जेल से ढक दें।
4. इलेक्ट्रोड के बीच मछली के सिर की स्थिति, मछली के सिर के वेंट्रल साइड में सकारात्मक इलेक्ट्रोड और पृष्ठीय पक्ष(चित्रा 1C)पर नकारात्मक इलेक्ट्रोड रखने, जबकि अभी भी स्पंज में मछली के शरीर को पकड़े हुए । यह सबवेंट्रिकुलर जोन में तैनात एपेंडीमोग्लिया को इलेक्ट्रोपॉरेट करने के लिए आवश्यक वर्तमान के प्रवाह की दिशा निर्धारित करता है।
5. इलेक्ट्रोड को धीरे-धीरे और ठीक टेलेंसेफेलन(चित्रा 1 सी) के खिलाफ दबाएं। पैर पेडल के साथ वर्तमान प्रशासन। इलेक्ट्रोड को तब तक रखें जब तक कि सभी पांच दालें समाप्त न हो जाएं।

Results

चित्रा 1: एवरटेड जेब्राफिश टेलेंसेफलन के कोरोनल सेक्शन का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। (क)जेब्राफिश टेलेंसेफलन के कोरोनल सेक्शन की योजना, जिसमें एपेंडीमोग्लियाल कोशिकाओं की स्थिति को रेखांकित किया गया है, जो वेंट्रिकुलर सतह को अस्तर कर रहे हैं और वेंट्रल वेंट्रिकुलर दीवार का निर्माण कर रहे हैं । पृष्ठीय एपेंडीमल परत दो गोलार्द्धों को पाट रही है और दो कोशिका परतों के बीच स्थित वेंट्रिकल (वी) को कवर कर रही है: ए...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ultrasound gel	SignaGel, Parker laboratories INC	15-60	Electrode Gel
BTX Tweezertrodes Electrodes	Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus	45-0486	1mm diameter
Electroporation device	BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus	45-0662