In Vivo Elektroporasjon: En stedsspesifikk metode for transfekt sebrafisk

In This Article

Abstract

Kilde: Durovic, T., et al. Elektroporasjonsmetode for In Vivo Levering av Plasmid DNA i Voksen Sebrafish Telencephalon. J. Vis. Uttr. (2019).

Denne videoen beskriver in vivo elektroporasjon, som er en teknikk for DNA-levering i ependymogliale celler i voksen sebrafisk.

Protocol

1. Elektroporasjon

Fjern fisken fra injeksjonsoppsettet mens du fortsatt holder den i svampen.
Senk innsiden av elektrodens spiss ned i ultralydgelen.
Dekk fisken telencephalon med en liten mengde ultralydgel.
Plasser fiskehodet mellom elektrodene, plasser den positive elektroden på ventralsiden av fiskens hode og den negative elektroden på dorsalsiden (figur 1C), mens du fortsatt holder fiskens kropp i svampen. Dette setter retningen på strømmen av strømmen som er nødvendig for å elektroporate ependymoglia plassert i subventrikulær sone.
Trykk elektrodene forsiktig og presist mot telencephalon (Figur 1 C). Administrer strømmen med fotpedalen. Hold elektrodene på plass til alle de fem pulsene er ferdige.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

figure-results-1
Figur 1: Skjematisk fremstilling av koronaldelen av den everted sebrafisk telencephalon. (A) Ordning av en koronal del av sebrafisk telencephalon, fremhever posisjonen til ependymogliale celler, som fôrer ventrikkeloverflate og bygger den ventrale ventrikkelveggen. Dorsal ependymal lag bygger bro mellom de to halvkule og dekker ventrikelen (V), som ligger mellom to cellelag: ependymoglial og ependymal. (<...