In Vivo Elektroporering: En platsspecifik metod för att transfekt zebrafisk

Abstract

Källa: Durovic, T., et al. Elektroporeringsmetod för in vivo-leverans av plasmid-DNA i den vuxna zebrafisken Telencephalon. J. Vis. Exp. (2019).

Denna video beskriver in vivo elektroporation, som är en teknik för DNA leverans till ependymoglial celler i vuxna zebrafisk.

Protocol

1. Elektroporering

1. Ta bort fisken från injektionsuppsättningen medan du fortfarande håller den i svampen.
2. Sänk ned den inre sidan av elektrodernas spets i ultraljudsgelen.
3. Täck fisken telencephalon med en liten mängd ultraljud gel.
4. Placera fiskhuvudet mellan elektroderna, placera den positiva elektroden på fiskens ventrala sida och den negativa elektroden på dorsalsidan (figur 1C), samtidigt som fiskens kropp fortfarande hållers i svampen. Detta anger riktningen för flödet av den ström som krävs för att elektroporera ependymoglia placerad i subventricular zon.
5. Tryck elektroderna försiktigt och exakt mot telencefalonen (Figur 1 C). Administrera strömmen med fotpedalen. Håll elektroderna på plats tills alla fem pulserna är klara.

Results

Figur 1: Schematisk representation av koronaldelen av den everted zebrafish telencephalon. a)System av en koronal del av zebrafisk telencephalon, belyser positionen för ependymoglial celler, som är foder Ventrikulärt yta och bygga ventral Ventrikulärt väggen. Dorsal ependymalt skikt överbryggar de två halvkloten och täcker ventrikeln (V), som ligger mellan två cellskikt: ependymoglial och ependymal.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ultrasound gel	SignaGel, Parker laboratories INC	15-60	Electrode Gel
BTX Tweezertrodes Electrodes	Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus	45-0486	1mm diameter
Electroporation device	BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus	45-0662