Overview
Denne videoen beskriver teknikken for å isolere tarmen for å evaluere tarmopptaket av bioaktive forbindelser. I denne prøven vil vi isolere tarmen fra en voksen sebrafisk for å analysere opptaket av immunostimulerende midler.
Protocol
1. Sebrafisk tarm disseksjon
- Etter en bestemt periode etter intubasjon(f.eks. 5 t og/eller 24 timer) plasserer du fisken med et nett i 300 mg/l etyl 3-aminobenzoat metansulfat (MS-222) oppløsning for eutanasi. Pass på at operculum slutter å bevege seg, og det er ingen hale klype refleks. Fem minutter er normalt tilstrekkelig.
- Plukk opp det euthanized dyret med et nett og legg det på et filterpapir.
MERK: Filterpapiret er veldig nyttig for å fjerne limvevet langs tarmen. - Bruk skarp disseksjon saks, lage et halvcirkelformet snitt fra anus til operculum og åpne snitt ved hjelp av fine pinsett. Klipp begge ender av tarmen, ta ut alle indre organer, og legg dem på filterpapiret.
FORSIKTIG: Arbeid raskt for å redusere cellemetabolisme og død.
MERK: Alternativt kan du fjerne limvevet i PBS og på is. - Skill tarmen fra indre organer, sørg for å holde orienteringen (fremre til bakre tarmsegment) og strekk den ut. Vanligvis er det fremre segmentet av tarmen bredere enn bakre segment. Pass på å få tak i all tarmen når du dissekerer.
MERK: Den bakre enden er ganske fin og skjør i liten fisk og kan bryte av, spesielt hos dyr <0,7 g. - Rull tarmen på filterpapiret med pinsett for å løsne limvevet fra tarmen.
- Fortsett å forberede tarmen for ulike nedstrømsanalyser
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MS-222 | Sigma Aldrich | E10521 | powder |
| 10x PBS | Sigma Aldrich | P5493 | |
| Filter paper | Filter-Lab | RM14034252 |
