Dissecção do intestino do peixe-zebra adulto: uma técnica para analisar a absorção de compostos

Abstract

Fonte: Jie J. et. al., Intubação oral de peixe-zebra adulto: um modelo para avaliar a absorção intestinal de compostos bioativos. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo descreve a técnica de isolamento do intestino para avaliar a absorção intestinal de compostos bioativos. Nesta amostra, isolaremos o intestino de um peixe-zebra adulto para analisar a captação de imunoestimulantes.

Protocol

1. Dissecção do intestino do peixe-zebra

1. Após um período de tempo especificado após a intubação (por exemplo, 5 h e/ou 24 h), coloque os peixes usando uma rede em uma solução de 300 mg/L de metanossulfonato de etilo 3-aminobenzoato (MS-222) para eutanásia. Certifique-se de que o opérculo pare de se mover e não haja reflexo de pinça da cauda. Cinco minutos são normalmente suficientes.
2. Pegue o animal sacrificado com uma rede e coloque-o sobre um papel de filtro.
   nota: O papel de filtro é muito útil para remover o tecido adesivo ao longo do intestino.
3. Usando uma tesoura de dissecção afiada, faça uma incisão semicircular do ânus ao opérculo e abra a incisão usando uma pinça fina. Corte as duas extremidades do intestino, retire todos os órgãos internos e coloque-os sobre o papel de filtro.
   cuidado: Trabalhe rapidamente para reduzir o metabolismo e a morte celular.
   nota: Como alternativa, remova o tecido adesivo em PBS e no gelo.
4. Separe o intestino dos órgãos internos, certificando-se de manter sua orientação (segmento intestinal anterior a posterior) e estique-o. Normalmente, o segmento anterior do intestino é mais largo que o segmento posterior. Tome cuidado para obter todo o intestino ao dissecar.
   nota: A extremidade posterior é bastante fina e frágil em peixes pequenos e pode quebrar, principalmente em animais <0,7 g.
5. Enrole o intestino no papel de filtro com uma pinça para separar o tecido adesivo do intestino.
6. Prossiga para preparar o intestino para várias análises a jusante

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	pó
10x PBS	Sigma Aldrich	Pág. 5493
Papel de filtro	Filtro-Laboratório	RM14034252