심장 해부: 제브라피쉬 심장 발달을 관찰하는 방법

이 비디오는 심장 발달, 성숙 및 노화를 연구하기 위해 여러 발달 단계에서 제브라피시에서 심장을 격리하는 기술을 설명합니다.

1. 물고기와 해부 측정

신선한 PBS로 채워진 페트리 접시 반에 단일 생선을 넣고 오른쪽에 놓습니다.
주미에서 꼬리(꼬리 받침대)까지 의 물고기 길이를 측정하길, 꼬리 지느러미를 포함하지 않고, 디지털 mm 캘리퍼(그림1)를이용하여 측정합니다. 이것은 표준 길이(SL)입니다.
각 물고기는 개별 물고기와 결과 해부 된 심장을 추적 할 수 있도록 숫자 / 문자 조합을 할당 할 수 있습니다. 부모 주식 번호, 고정 연령, SL 측정 을 포함한 데이터는 스프레드시트에 입력되어 이러한 라벨을 기반으로 구성되었습니다.
해부 하기 전에 할당 된 추적 번호와 PCR 튜브 스트립 레이블 및 PBT 또는 추가 분석에 대 한 적절 한 다른 솔루션으로 채우기.
눈과 아가미 사이에 머리를 잡고 집게로 몸을 안정시키면서 페트리 접시에 생선 복부 측면을 오리엔트(그림 1).

작은 물고기 (12mm SL 보다 작은):

a) 날카로운 집게 또는 핀 홀더에 마이크로 바늘을 사용하여 몸에서 가슴 근육과 지느러미를 제거하여 심장을 드러냅니다. 해부 중 집게의 일정한 움직임은 물고기를 이동하는 PBT의 전류를 일으킬 수 있습니다. 이것은 작은 물고기에 대 한 특히 문제가, 따라서 마이크로 바늘 가슴 근육과 지느러미를 제거 하 고 신체 구멍을 열 수 있습니다.
a) 부드럽게 집게를 사용하여 심혼을 아트리움 아래에서 캐비티에서 제거합니다. 또는 일부 물고기에서는 구근을 부드럽게 당겨 심장을 제거 할 수 있으며 나머지 는 다음과 같습니다. 이 기술을 사용하면 쉽게 손상될 수 있으므로 아트리움의 위치를 주의하십시오. 심장과 함께 제공되는 여분의 조직이있는 경우, 그것은 괜찮으며 후에 지울 수 있습니다.
a) 물고기가Tg(myl7:GFP)^twu34와같은 형광성 심장 마커를 포함하는 경우, 해부에 형광 범위를 사용하고 꽃으로 심장의 제거를 확인한다(그림2).
a) 심장이 구멍에서 제거되면, 심장과 마이크로 바늘을 잡고 심장의 외부에서 여분의 비 심장 조직과 상골 안대기를 제거하기 위해 집게를 사용합니다.

더 큰 물고기 (12mm SL 보다 큰):

b) 스프링 핸들 마이크로 가위를 사용하여, 1mm 미만의 3개의 절개를 합니다: 1-횡방향 절단을 통해 2-전방 배에서 횡가로 절단3-두 컷을 연결하는 복부 측에 처질컷(그림 3).
b) 날카로운 집게를 사용하여 몸에서 가슴 근육과 지느러미를 제거하여 신체 구멍을 열고 심낭(도 4A)의은색 조직을 드러냅니다. 이 심근 조직을 제거하고 심장이 눈에 띄게됩니다(그림 4B).
b) 마이크로 가위를 사용하여 심장보다 우수한 구근 동맥에 연결된 동맥을 절단하십시오. 이 동맥이 절단되면, 아트리움 아래에 집게 팁을 넣어, 구멍에서 심장을 특종하는 집게를 사용합니다. 심장과 함께 제공되는 여분의 조직이있는 경우, 그것은 괜찮으며 나중에 제거 할 수 있습니다.
b) 심장이 캐비티에서 제거되면, 심장을 잡고 여분의 조직을 제거하기 위해 두 개의 집게를 사용, 또는 여분의, 비 심장 조직을 제거하기 위해 심장과 마이크로 바늘의 한 쌍을 제거합니다. 검은 색소 침착으로 뚜렷한 상심 안감은 조직을 부드럽게 긁어 내어 원하는 경우 심장 외부에서 제거 할 수 있습니다.

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그림 1. 눈과 아가미 사이에 집게로 물고기를 잡습니다.

그림 2. 여기에 도시된 Tg(myl7:GFP)^twu34와같은 심장 특이적 형광 형질 형질 전환 마커는 작은 물고기에서 해부된 심장을 시각화하는 데 도움이 될 수 있다.

그림 3. 가슴 근육과 피부를 제거하는 세 가지 절개 : 1- 아가미 를 통해 절단 2- 전방 배에서 횡가로 잘라 3- 두 컷을 연결하는 복부 측에 처진 컷.

그림 4. 검은 글자는 심장의 챔버에 레이블: 구근 동맥 (바), 심실 (v), 그리고 아트리움 (a).
A- 상체 공동은 심낭의 은색 조직을 보여주기 위해 열려 있습니다.
B- 심낭을 제거 한 후, 심장이 보이고 쉽게 제거됩니다.

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