نموذج اعتلال عضلة القلب في أسماك الزرد: السمية القلبية الناجمة عن الأدوية

Abstract

المصدر: Ma X., et. al. نموذج اعتلال عضلة القلب الناجم عن الدوكسوروبيسين في أسماك الزرد البالغة. J. Vis. Exp. (2018).

يصف هذا الفيديو تقنية إنشاء نموذج اعتلال عضلة القلب لسمك الزرد مع الحد الأدنى من الاختلافات بين المجموعات التجريبية وفي العينة ، نقوم بإنشاء نموذج اعتلال عضلة القلب لسمك الزرد باستخدام عقار دوكسوروبيسين.

Protocol

فئة

1. حقن DOX في الأسماك البالغة

1. ضع طبق بتري نظيف مقاس 100 مم مع إسفنجة بداخله ، تحت مجهر تشريح ، ثم اضبط التركيز. اقطع الإسفنجة لعمل تجويف يبلغ طوله حوالي 4 سم لحمل سمكة. اصنع تجويفا أطول لسمكة أكبر.
2. تحضير إبرة 34 جم مع حقنة دقيقة 10 ميكرولتر. اشطف الإبرة باستخدام 1x HBSS buffer لإزالة أي فقاعات وكتل من المحقنة والأنبوب.
3. تخدير الأسماك البالغة في ماء الجنين الذي يحتوي على 0.16 مجم / مل من التريكائين لمدة 2 دقيقة < br / > ملاحظة: يمكن أن يتسبب التخدير المطول لأكثر من 5 دقائق متبوعا بحقن DOX في موت الأسماك بسهولة.
4. انقع الإسفنجة في ماء الجنين مع التريكين ، وانقل السمك إلى الإسفنجة للحقن.
5. قم بإجراء حقن IP DOX بأي من الطريقتين الموضحة أدناه.
   1. حقن IP الكلاسيكي
      1. ضع السمكة مع البطن لأعلى في تجويف الإسفنجة. أدخل الإبرة بسرعة ، بزاوية 45 درجة على جسم السمكة في خط الوسط بين زعانف الحوض ، واخترق حوالي 1-2 مم. حرر كل حلول DOX ببطء. انتظر 5 ثوان قبل سحب الإبرة. تحقق من تسليم DOX بلون أحمر مرئي في بطن السمكة.
   2. حقن IP البديل
      1. ضع السمكة بشكل جانبي على الإسفنجة مع الجزء الأمامي إلى اليمين. قم بتثبيت السمكة برفق باستخدام ملقط نهاية حادة باليد اليسرى ، وامسك المحقنة الدقيقة باليد اليمنى.
      2. ضع الإبرة أسفل الخط الجانبي فوق زعنفة الحوض ، بحيث يكون الشطبة متجهة لأعلى. مشيرا إلى موضع الساعة 7 بزاوية 45 درجة ، أدخل الإبرة 3-4 مم في تجويف السمكة الموجود بين الحوض والزعانف الشرجية ، ثم اضغط على المكبس ببطء. تحقق من تسليم DOX بلون أحمر مرئي في بطن السمكة.
6. انقل الأسماك المحقونة بسرعة إلى خزان معبر نظيف مملوء بمياه النظام العذبة للسماح للأسماك بالتعافي. اشطف الإبرة مرة واحدة باستخدام 1x HBSS Buffer بين الحقن.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments خزان العبور أكوانيرينغ ZHCT100 تربية الأسماك دوكسوروبيسين هيدروكلوريد سيغما د1515-10 ملغ محلول الملح المتوازن من هانك (HBBS) ثيرموفيشر 14025076 مركبة ل DOX طبق بتري 100 مم صقر 431741 10 ميكرولتر حقنة صغيرة NanoFil WPI نانوفيل للحقن 34 إبرة قياس WPI NF34BV-2 للحقن التريكايين ارجنت تخدير الأسماك