ゼブラフィッシュ心筋症モデル:薬物誘発性心毒性

Abstract

出典:Ma X., et. al.成体のゼブラフィッシュにおけるドキソルビシン誘発性心筋症モデル。J. Vis. Exp.(2018年)。

この動画では、ゼブラフィッシュ心筋症モデルを実験群間のばらつきを最小限に抑えて作成する手法を説明しています。また、サンプルでは、ドキソルビシンという薬剤を用いてゼブラフィッシュ心筋症モデルを作成しています。

Protocol

1. 成魚へのDOXインジェクション

1. スポンジを入れた清潔な100mmのシャーレを解剖顕微鏡の下に置き、ピントを調整します。スポンジを切って、魚を挟むための長さ約4cmの空洞を作ります。大きな魚のために長い空洞を作ります。
2. 10 μLのマイクロシリンジで34 Gの針を調製します。針を1x HBSSバッファーですすいで、シリンジとチューブから気泡やブロックを取り除きます。
3. 成魚を0.16 mg / mLトリカインを含む胚水で2分間麻酔します.
   注:5分以上の長時間の麻酔とそれに続くDOX注射は、魚を簡単に死に至らしめる可能性があります。
4. トリカインを入れた胚水にスポンジを浸し、魚をスポンジに移して注射します。
5. IP DOXインジェクションは、以下で説明する2つの方法のいずれかで実行します。
   1. クラシック IP インジェクション
      1. 腹部を上にして魚をスポンジの空洞に置きます。魚の体に対して45°の角度で針を骨盤のヒレの間の正中線にすばやく挿入し、約1〜2mm貫通します。すべてのDOXソリューションをゆっくりとリリースします。針を引き出す前に5秒待ちます。魚の腹に見える赤い色でDOXの配達を確認してください。
   2. 代替IPインジェクション
      1. 魚をスポンジの上に横向きに置き、前方を右に置きます。左手で鈍い先端鉗子を使用して魚をやさしく安定させ、右手でマイクロシリンジを持ちます。
      2. 針を骨盤フィンの上の側線の下に置き、斜角を上に向けます。7時の位置を45°の角度で指し、骨盤と臀鰭の間にある魚の空洞に針を3〜4mm挿入し、プランジャーをゆっくりと押し下げます。魚の腹に見える赤い色でDOXの配達を確認してください。
6. 注入した魚を新鮮なシステム水で満たされたきれいなクロッシングタンクにすばやく移し、魚が回復できるようにします。注射の間に1x HBSSバッファーで針を一度すすいでください。.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
クロッシングタンク	アクアニアリング	ZHCT100	養魚
塩酸ドキソルビシン	シグマ	D1515-10MG
ハンクの平衡塩溶液(HBBS)	サーモフィッシャー	14025076	DOX用車両
100mmシャーレ	隼	431741
10 μL NanoFil マイクロシリンジ	WPIの	ナノフィル	インジェクション用
34ゲージニードル	WPIの	NF34BV-2	インジェクション用
トリカイン	銀色		魚の麻酔

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