1. Generatie Zebravis met Diabetes mellitus, DM Fish
<ol><li>Bereid zowel herstel- als verdovingswatertanks voor. Terugwinningswater is normaal viswater. Voeg voor verdovingswater voldoende 2-fenoxyethanol toe, zodat een verdunning van 1:1.000 in normaal viswater wordt bereikt.</li>
	<li>Bereid een 0,3% oplossing (in een zuurkast) streptozocine (STZ) door 6 mg STZ toe te voegen aan 2 ml 0,09% natriumchloride en plaats de oplossing onmiddellijk op ijs . Dit biedt voldoende injectieoplossing voor de injectie van ongeveer 20 vissen in 20 minuten. Als u de markering van 20 minuten overschrijdt, stop dan en maak een nieuwe STZ-oplossing voordat u doorgaat. In een aparte tube aliquot voldoende zoutoplossing voor het beheersen van vissen. Zodra de STZ is oplosbaar, vereisen alle volgende stappen geen gebruik van de zuurkast.</li>
	<li>Vul een 1/2 cc spuit uitgerust met een 27 1/2 gauge naald met de STZ of besturingsoplossingen om ervoor te zorgen dat er geen luchtbellen worden opgesloten.</li>
	<li>Verdoof elke vis afzonderlijk door de vis in verdovingswater te plaatsen en wacht tot hun zwembeweging stopt (1-2 minuten).</li>
	<li>Eenmaal verdoofd, plaats de vis kort op een papieren handdoek om overtollig water te absorberen, plaats de vis in een weegboot en meet de massa van de vis.</li>
	<li>Plaats de vis op een stevig oppervlak (petrischaaldeksel) voor injectie.</li>
	<li>Injecteer de STZ of controleoplossing in de peritoneale holte van de vis door de naald langs de schuine kant in het achterste aspect van het ventrale peritoneum te steken.</li>
	<li>0,35 mg/g (350 mg/kg) STZ moet aan elke vis worden geleverd en het volume van de vereiste 0,3% oplossing kan op de volgende manier worden berekend.<ol>
<li>Vermenigvuldig de massa van de vis (g) met 0,35 om de vereiste hoeveelheid STZ in mg op te leveren.</li>
		<li>deel het product dat hierboven wordt gegenereerd door 3 om het volume van de 0,3% oplossing die nodig is voor injectie in μl op te leveren. Monster: Voor een vis van 0,5 g : a) 0,5 x 0,35 = 0,175 b) .0175/3= 0,058 ml = 58 μl. Hetzelfde volume zonder de STZ zou worden geïnjecteerd voor een controlevis. Er moet een blad worden gegenereerd voor de te injecteren hoeveelheden per vismassa en moet worden gebruikt voor snelle referentie.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Plaats de vissen na injectie in de terugwinningswatertank en controleer ze op normale zwemactiviteit. Zodra dit is bereikt, worden de vissen overgebracht naar een normale levende tank die wordt gehandhaafd bij het verlaagde temperatuurbereik van 22 ° C - 24 ° C. Deze verlaagde temperatuur is van cruciaal belang voor een efficiënte inductie van hyperglykemie (diabetes mellitus, DM).</li>
	<li>Hoewel hyperglykemie wordt gedetecteerd binnen 24 uur na de eerste injectie, om een langdurige toestand van zeer hoge hyperglykemie te induceren, vereisen de zebravissen een frequente injectie-inductiefase gevolgd door wekelijkse onderhoudsinjecties zoals hieronder weergegeven.</li>
</ol>Week 1: 3 injecties (Dag 1, 3, 5), Week 2: 1 injectie (Dag 12), Week 3: 1 injectie (Dag 19), Week 4: (Dag 21) Voer een rentetest uit.
Op dit punt worden de zebravissen beschouwd als in een langdurige staat van hyperglykemie en vertonen ze de diabetische complicaties van retinopathie, nefropathie en ook verminderde vinregeneratie. Deze worden DM-vissen genoemd. Bovendien kan de vis indien gewenst in de hyperglycemische toestand worden gehouden met wekelijkse onderhoudsinjecties. Ongeveer 5% overlijden tijdens dit proces moet worden verwacht.

<table><tbody><tr><td>Streptozocin&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0130</td><td></td></tr><tr><td>2 phenoxyethanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P1126</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel (size 10)&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>089275A</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-13</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac12; cc syringe, with 27 1/2 gauge needle&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Chloride&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&amp;nbsp;S3014</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Microscope&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Nikon</td><td>TMZ-1500</td><td>Any dissecting microscope is fine.</td></tr></tbody></table>

streptozocine behandeling: een zebravis model van type 1 diabetes mellitus

Streptozocin Treatment: A Zebrafish Model of Type 1 Diabetes Mellitus

Bron: Intine R. V., et. al. <a href="https://www.jove.com/v/50232/a-zebrafish-model-of-diabetes-mellitus-and-metabolic-memory" target="_blank">A Zebrafish Model of Diabetes Mellitus and Metabolic Memory</a>. J.Vis. Exp. (2013).
Deze video beschrijft de techniek van het maken van een zebravismodel voor type 1 diabetes mellitus met behulp van het medicijn Streptozocine, om de pathofysiologie van diabetische complicaties en metabolisch geheugen te bestuderen.

Streptozocine behandeling: een zebravis model van type 1 diabetes mellitus

Source: Intine R. V., et. al. A Zebrafish Model of Diabetes Mellitus and Metabolic Memory. J. Vis. Exp. (2013).
This video describes the technique of ...

- Type 1 diabetes mellitus is a human disease in which the immune system destroys insulin making beta cells in the pancreas. Streptozocin can induce type 1 diabetes mellitus in zebrafish. First, anesthetize a fish in a solution of 2-phenoxyethanol in fish water. Take the fish and place it on a Petri dish, ventral side facing upwards. Calculate the dose of streptozocin based on 0.35 milligrams per gram of the fish&#39;s weight and dilute it in saline solution.
Administer the streptozocin by intraperitoneal injection below the pelvic girdle on the ventral side of the zebrafish. Streptozocin is structurally similar to N-acetylglucosamine, a ligand that binds the GLUT2 receptor on pancreatic beta cells, leading to secretion of insulin. Thus, streptozocin binds to GLUT2 receptors present on pancreatic beta cells which transport it inside the cells.
Upon entering the beta cells, streptozocin triggers an immune response leading to the release of autoantigens. The autoantigens cause the immune system to recognize beta cells as foreign and destroy them leading to reduced levels of insulin. Administer repeated doses of streptozocin on days three and five, followed by weekly doses, one every seve

streptozocin-treatment-a-zebrafish-model-of-type-1-diabetes-mellitus

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Biologie

Danio rerio (zebrafish)

Danio rerio (zebravis)

Adult

Volwassene

2.6K Views. - Type 1 diabetes mellitus is a human disease in which the immune system destroys insulin making be...

Abstract

Protocol

<table><tbody><tr><td>Streptozocin&nbsp;&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0130</td><td></td></tr><tr><td>2 phenoxyethanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P1126</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel (size 10)&nbsp;&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>089275A</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-13</td><td></td></tr><tr><td>&frac12; cc syringe, with 27 1/2 gauge needle&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Chloride&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&nbsp;S3014</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Microscope&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>TMZ-1500</td><td>Any dissecting microscope is fine.</td></tr></tbody></table>

Streptozocine behandeling: een zebravis model van type 1 diabetes mellitus

In This Article

Abstract

Protocol

Materials

Explore More Articles

Name	Company	Catalog Number	Comments
Streptozocin	Sigma Aldrich	S0130
2 phenoxyethanol	Sigma Aldrich	P1126
Scalpel (size 10)	Fisher Scientific	089275A
Petri Dishes	Fisher Scientific	08-757-13
½ cc syringe, with 27 1/2 gauge needle	Fisher Scientific	305620
Sodium Chloride	Sigma Aldrich	S3014
Dissecting Microscope	Nikon	TMZ-1500	Any dissecting microscope is fine.