ट्यूमर इंटरस्टिशियल द्रव दबाव का स्थानिक माप: इंटरस्टिशियल द्रव दबाव को मापने की एक विधि

Abstract

स्रोत: स्टेपलेटन एट अल., परफ्यूजन के माप, इंटरस्टिशियल फ्लूइड प्रेशर और लिपोसोम्स संचय ठोस ट्यूमर में। जे विस Exp. (२०१६) ।

यह वीडियो एक छवि निर्देशित रोबोट प्रणाली का उपयोग कर परफ्यूजन इमेजिंग द्वारा एक ट्यूमर के भीतर मध्यवर्ती द्रव दबाव को मापने की एक तकनीक का वर्णन करता है । माप की तुलना एक ठोस ट्यूमर के भीतर लिपोसोम्स के इंट्रा-ट्यूमरल संचय से की जाती है।

Protocol

1. ट्यूमर इंटरस्टिशियल द्रव दबाव के स्थानिक माप

1. IFP को मापने के लिए 25 जी रीढ़ की हड्डी सुई को प्रेशर ट्रांसड्यूसर से और 50 सेमी पीई20 पॉलीथीन ट्यूबिंग के माध्यम से आईएफपी अधिग्रहण प्रणाली से कनेक्ट करें। एक हेपरिन सल्फेट/नमकीन समाधान (1:10) के साथ पूरे सिस्टम फ्लश । उपयोग से पहले सुई को 70% आइसोप्रोपिल के साथ स्टरलाइज करें।
2. अधिग्रहण प्रणाली को चालू करें और आईएफपी अधिग्रहण सॉफ्टवेयर लॉन्च करें और एमएमएचजी में आईएफपी माप प्राप्त करने के लिए सिस्टम को कैलिब्रेट करने के लिए सेटिंग्स फाइलों को लोड करें। लगातार IFP डेटा एकत्र करने के लिए अधिग्रहण बटन पर क्लिक करें।
3. सीटी-लिपोसोम के 48 और 72 घंटे के बाद इंजेक्शन के बीच IFP माप करें (यह वर्णित विधि का उपयोग करके, ट्यूमर में सीटी-लिपोसोम के पीक संचय के अनुमानित समय से मेल खाता है।
   1. 400 मिलीग्राम आयोडीन केजी^-1की सांद्रता पर सीटी-लिपोसोम के बोलस इंजेक्ट करने के लिए सिरिंज पंप का उपयोग करें। पंप को लगभग 150 माइक्रोल (25 ग्राम माउस संभालने) की मात्रा इंजेक्ट करने के लिए सेट करें। इंजेक्शन लगाने के लिए पंप पर 'स्टार्ट' बटन दबाएं। मैन्युअल रूप से खारा के 50 माइक्रोन के साथ कैथेटर फ्लश (कैथेटर की मात्रा दो बार) सुनिश्चित करने के लिए पूरे एजेंट राशि इंजेक्शन था और कैथेटर स्पष्ट है।
      सीटी-आईएफपी रोबोट को आईएफपी सुई अटैच करें।
4. सीटी-आईएफपी रोबोट और सीटी स्कैनर के लिए समन्वय प्रणालियों को संरेखित करने के लिए अंशांकन स्कैन करें। सीटी-आईएफपी रोबोट में फिड्यूशियल मार्कर अटैचमेंट जोड़ें और चार अलग-अलग पदों पर फिड्यूशियल मार्कर के साथ चार वॉल्यूमेट्रिक सीटी स्कैन करें।
   1. सीटी-आईएफपी रोबोट नियंत्रक सॉफ्टवेयर लॉन्च करें, रोबोट को शुरू करें, और एक्स, वाई, जेड टार्गेटिंग पोजिशन में प्रवेश करके और 'गो' बटन पर क्लिक करके रोबोट को तीन पदों पर ले जाएं।
   2. निम्नलिखित x,y, z निर्देशांक पर सीटी स्कैन लें: (1) 0,0,0; (2) -10,0,0; (3) 0,7,0; और (4) 0,0,10। सीटी स्कैनर सॉफ्टवेयर का उपयोग कर एक 90 केवी, 10 एमए, 16 सेकंड स्कैन का चयन करें और स्कैन शुरू करने के लिए 'शुरू' प्रेस। वर्णित स्कैन का पुनर्निर्माण करें। खारा (मात्रा से 9:1 अनुपात) के साथ मिश्रित मुक्त iohexol के १०० माइक्रोन की मात्रा इंजेक्ट करने के लिए सिरिंज पंप की स्थापना करके एक DCE-सीटी स्कैन प्रदर्शन करते हैं ।
      1. सीटी स्कैनर कंसोल पर 5 मिनट गतिशील स्कैन का चयन करें जो 80 केवी की एक्स-रे ऊर्जा सेटिंग का उपयोग करता है, 90mA की एक ट्यूब ऊर्जा, और पहले 30 सेकंड के लिए हर सेकंड में 416 छवि अनुमानों को कैप्चर करता है और इसके बाद हर 10 सेकंड में अधिग्रहण होता है। डीसीई-सीटी डेटा के 5 सेकंड कैप्चर करें और फिर इंजेक्शन पंप पर स्टार्ट बटन दबाएं।
      2. डीसीई-सीटी स्कैन के बाद एक वॉल्यूमेट्रिक शारीरिक माइक्रो सीटी स्कैन करते हैं ।
5. सीटी-आईएफपी रोबोट अलाइनमेंट सॉफ्टवेयर लॉन्च करें। 'पंजीकरण डेटा' क्षेत्र में लोड किए गए 'ऐड' बटन पर क्लिक करें और 1.3 में प्राप्त चार पुनर्निर्मित पंजीकरण स्कैन का चयन करें, फिर 'ओपन' पर क्लिक करें।
   नोट: फिड्यूशियल मार्कर का पिक्सल लोकेशन अपने आप सॉफ्टवेयर में दर्ज हो जाएगा।
   1. 'कैलोक ट्रांसफॉर्म' बटन पर क्लिक करें और फिर 'अप्लाई ट्रांसफॉर्म' बटन पर क्लिक करें। यह संरेखण डेटा उत्पन्न करता है जिसका उपयोग सीटी-आईएफपी रोबोट समन्वय प्रणाली को सीटी स्कैनर समन्वय प्रणाली में बदलने के लिए किया जाएगा। अंशांकन पूरा होने के बाद, सीटी-आईएफपी रोबोट के लिए पशु मंच संलग्न करें।
6. चिकित्सा हवा या ऑक्सीजन के साथ मिश्रित 2% आइसोफ्लुनान का उपयोग करके प्रत्येक माउस को एनेस्थेटाइज करें और पंजे को चुटकी देकर पुष्टि करें और कोई प्रतिक्रिया न देखें। सीटी-आईएफपी रोबोट प्लेटफॉर्म पर जानवर को स्थिर करें और माउस को ऐसी स्थिति में रखें कि ट्यूमर सीटी-आईएफपी रोबोट सिस्टम के लिए सुलभ हो। टेप का उपयोग कर ट्यूमर को स्थिर करें कि यह IFP सुई प्रविष्टि के दौरान नहीं चलता है।
7. आईएफपी सुई डालने से पहले एक शारीरिक माइक्रो-सीटी स्कैन करें। 1.2 में वर्णित चरणों का उपयोग करके सीटी डेटा का पुनर्निर्माण करें।
8. सीटी-आईएफपी रोबोट अलाइनमेंट सॉफ्टवेयर में प्री-सुई डालने सीटी डेटा लोड करें। ट्यूमर की कल्पना करने के लिए खिड़की और स्तर को समायोजित करें। किसी भी छवि में ट्यूमर के रिम पर क्लिक करें, तो एक दूसरे रिम स्थान पर क्लिक करें ।
   नोट: सॉफ्टवेयर दो पदों के बीच एक रैखिक रेखा के साथ पदों की एक श्रृंखला की गणना करेगा । सूची से 5 से 8 समान रूप से दूरी की स्थिति की एक श्रृंखला के लिए एक्स, वाई और जेड निर्देशांक नोट करें।
9. सम्मिलन से पहले हेपरिन खारा समाधान के साथ सुई फ्लश करके IFP प्रणाली तैयार करें।
10. एक्स,वाई, जेड में पहले पूर्व निर्धारित सुई पदों को सीटी-आईएफपी रोबोट नियंत्रण सॉफ्टवेयर में दर्ज करें और रोबोट को वांछित स्थिति में ले जाने के लिए 'गो' बटन पर प्रेस-मूव करें। ऊतक में सुई डालने के लिए 'डालने सुई' बटन पर क्लिक करें।
    1. सुई डालने के बाद IFP सुई और ऊतक के बीच अच्छा तरल पदार्थ संचार सुनिश्चित चुटकी और PE20 टयूबिंग जारी करके, टिप्पण है कि IFP माप बढ़ जाती है और IFP अधिग्रहण सॉफ्टवेयर पर पूर्व चुटकी मूल्य के लिए रिटर्न । बेसलाइन पर लौटने वाले मापों को अस्वीकार करें।
11. डाला सुई के साथ एक शारीरिक सीटी स्कैन प्राप्त करें, तो ऊतक से सुई वापस लेने के लिए सीटी-IFP रोबोट नियंत्रण सॉफ्टवेयर पर ' वापस लेना सुई ' बटन पर क्लिक करें । किसी भी IFP माप को अस्वीकार करें जहां आईएफपी मूल्य सुई की वापसी के बाद पूर्व-सुई प्रविष्टि मूल्य पर वापस नहीं आता है। यह दर्शाता है सुई माप के दौरान भरा गया हो सकता है । प्रत्येक सुई की स्थिति के लिए 1.8 से 1.10 चरणों को दोहराएं।
12. सुई के पोस्ट-सम्मिलन वॉल्यूमेट्रिक सीटी स्कैन में पहचाने जाने वाले ट्यूमर की मात्रा के द्रव्यमान के केंद्र के सापेक्ष सुई बंदरगाह के एक्स, वाई और जेड पोजीशन की गणना करके ट्यूमर की मात्रा के भीतर सुई की स्थिति का निर्धारण करें।
13. सभी माप पूरा होने के बाद जानवरों को उनके पिंजरे में लौटाएं। जानवरों को उपेक्षित न छोड़ें, और उन्हें तब तक निरीक्षण करने का ध्यान रखें जब तक कि चेतना वापस नहीं आ जाती और वे स्टर्नल रेक्यूबेंसी बनाए रखने में सक्षम न हों।

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Omnipaque (Iohexol) 300 mg of iodine/ml	GE Healthcare, CA
eXplore Locus Ultra micro-CT system	GE Healthcare, CA		Manipulated using CT-Console Software
27 G Catheter SURFLO Winged Infusion Set	Terumo Medical Products, USA	SV*27EL
PE20 polyethylyne tubing	Becton Dickinson, USA	427406
Pen tip 25 G × 3.5′′ Whitacre spinal needle	Becton Dickinson, USA	405140	IFP needle
P23XL pressure transducer	Harvard Apparatus, CA	P23XL
PowerLab 4/35, Bridge Amp, with LabChart Pro 7.0	ADInstruments Pty Ltd., USA	PL3504, FE221	IFP acquisition system and acquisition software
CT-Sabre Small Animall Intervention system (CT-IFP Robot)	Parallax Innovations, CA		Manipulated using CT-IFP robot Control Software
CT-IFP robot alignment software Custom Matlab software
DCE-CT Analysis Software			Custom Matlab software