Пространственное измерение давления интерстициальной жидкости опухоли: метод измерения давления интерстициальной жидкости

Overview

Это видео описывает метод измерения интерстициального давления жидкости в опухоли с помощью перфузионной визуализации с помощью роботизированной системы с наведением изображения. Измерения сравниваются с внутрио опухолевым накоплением липосом в твердой опухоли.

Protocol

1. Пространственные измерения давления опухолевых интерстициальных жидкостей

1. Для измерения IFP подключите спинную иглу 25 G к препоньщику давления и к системе приобретения IFP через 50 см полиэтиленовой трубки PE20. Промыть всю систему с гепарином сульфатом/солевым раствором (1:10). Стерилизовать иглу с 70% изопропил перед использованием.
2. Включите систему приобретения и запустите программное обеспечение для приобретения IFP и загрузите файлы настроек для калибровки системы для получения измерений IFP в mmHg. Нажмите кнопку приобретения, чтобы непрерывно собирать данные IFP.
3. Выполните измерения IFP между 48 и 72 часами после инъекции КТ-липосом (это соответствует приблизительному времени пикового накопления КТ-липосом в опухоли), используя описанный метод.
   1. Используйте шприц насос для введения болюса КТ-липосомы в концентрации 400 мг йода кг^-1. Установите насос, чтобы ввести объем около 150 мкл (при условии, 25 г мыши). Нажмите кнопку "начать" на насосе, чтобы ввести. Вручную промыть катетер с 50 мкл солевого раствора (в два раза больше катетера), чтобы обеспечить все количество агента был введен и катетер ясно.
      Прикрепите иглу IFP к роботу CT-IFP.
4. Выполните калибровку для выравнивания систем координат для робота CT-IFP и КТ-сканера. Добавьте фидуциальное вложение маркера к роботу CT-IFP и выполните четырехтомную компьютерную томографию с фидуциальный маркер в четырех различных положениях.
   1. Запустите программное обеспечение контроллера робота CT-IFP, инициализируйте робота и переместите робота на три позиции, введя позиции x,y,z и нажав кнопку «идти».
   2. Сделайт компьютерную томографию по следующим координатам x,y,z: (1) 0,0,0; (2) -10,0,0; (3) 0,7,0; и (4) 0,0,10. Выберите 90 кВ, 10 мА, 16 сек сканирования с помощью программного обеспечения КТ-сканера и нажмите "Старт", чтобы инициировать сканирование. Реконструкция сканирования, как описано. Выполните DCE-CT сканирование, установив шприц насос для введения объема 100 мкл свободного iohexol смешивается с солевым раствором (9:1 соотношение по объему).
      1. На консоли CT-сканера выберите 5-минутное динамическое сканирование, которое использует рентгеновский параметр энергии 80 кВ, энергию трубки 90 мА, и захватывает 416 проекций изображения каждый сек в течение первых 30 секунд, а затем приобретение каждые 10 сек. Захват 5 сек данных DCE-CT, а затем нажмите кнопку запуска на насосе впрыска.
      2. После сканирования DCE-CT выполняют томтрическую анатомическую микроКТ- сканирование.
5. Запуск программного обеспечения выравнивания робота CT-IFP. Нажмите кнопку «добавить», загруженную в регионе «Регистрационные данные», и выберите четыре реконструированных регистрационных сканирования, полученных в 1.3, а затем нажмите кнопку «открыть».
   ПРИМЕЧАНИЕ: Местоположение пикселя фидуциального маркера автоматически будет внесено в программное обеспечение.
   1. Нажмите кнопку «Рассчитать преобразование», а затем нажмите кнопку «Применить преобразование». Это генерирует данные выравнивания, которые будут использоваться для преобразования системы координат робота CT-IFP в систему координат КТ-сканера. После завершения калибровки прикрепите платформу животного к роботу CT-IFP.
6. Анестезировать каждую мышь с помощью 2% изофлюран смешивается с медицинским воздухом или кислородом и подтвердить, щипать ноготь и не наблюдая никакой реакции. Обездвижить животное на платформе робота CT-IFP и распоить мышь таким образом, чтобы опухоль была доступна для роботизированной системы CT-IFP. Обездвижить опухоль с помощью ленты так, чтобы она не двигаться во время вставки иглы IFP.
7. Выполните анатомические микро-КТ до вставки иглы IFP. Реконструкция данных КТ с использованием шагов, описанных в 1.2.
8. Загрузите данные КТ до вставки иглы в программное обеспечение выравнивания робота CT-IFP. Отрегулируйте окно и уровень, чтобы визуализировать опухоль. Нажмите на край опухоли на любом изображении, а затем нажмите на второе место обода.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Программное обеспечение будет вычислять ряд позиций вдоль линейной линии между двумя позициями. Обратите внимание на координаты x, y и z для серии от 5 до 8 равномерно разметь позиции из списка.
9. Подготовьте систему IFP, промыв иглу солевым раствором гепарина перед вставкой.
10. Введите первые заранее определенные позиции иглы в X,y,z, в программное обеспечение для управления роботом CT-IFP и нажмите кнопку "идти", чтобы переместить робота в нужное положение. Нажмите кнопку "Вставьте иглу", чтобы вставить иглу в ткань.
    1. После вставки иглы обеспечить хорошую жидкость связи между иглой IFP и ткани, щипать и выпускать PE20 трубки, упомяая, что измерение IFP увеличивается и возвращается к предварительной щипать значение на программное обеспечение приобретения IFP. Отклонить измерения, которые не возвращаются к исходной линии.
11. Приобрети анатомические КТ с иглой вставлены, а затем нажмите кнопку "Retract Needle" на CT-IFP программного обеспечения управления роботом, чтобы вытянуть иглу из ткани. Отклонить любые измерения IFP, когда значение IFP не возвращается к значению вставки предварительной иглы после вывода иглы. Это означает, что игла можно было засорить во время измерения. Повторите шаги от 1,8 до 1,10 для каждой позиции иглы.
12. Определите положение иглы в объеме опухоли, вычислив позиции x, y и z порта иглы относительно центра массы объема опухоли, как это определено в томографии после вставки КТ иглы.
13. Вернуть животных в клетку после завершения всех измерений. Не оставляйте животных без присмотра, и заботиться, чтобы наблюдать за ними, пока сознание не было восстановлено, и они в состоянии поддерживать суровую лежа.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Omnipaque (Iohexol) 300 mg of iodine/ml	GE Healthcare, CA
eXplore Locus Ultra micro-CT system	GE Healthcare, CA		Manipulated using CT-Console Software
27 G Catheter SURFLO Winged Infusion Set	Terumo Medical Products, USA	SV*27EL
PE20 polyethylyne tubing	Becton Dickinson, USA	427406
Pen tip 25 G × 3.5′′ Whitacre spinal needle	Becton Dickinson, USA	405140	IFP needle
P23XL pressure transducer	Harvard Apparatus, CA	P23XL
PowerLab 4/35, Bridge Amp, with LabChart Pro 7.0	ADInstruments Pty Ltd., USA	PL3504, FE221	IFP acquisition system and acquisition software
CT-Sabre Small Animall Intervention system (CT-IFP Robot)	Parallax Innovations, CA		Manipulated using CT-IFP robot Control Software
CT-IFP robot alignment software Custom Matlab software
DCE-CT Analysis Software			Custom Matlab software