غير الغازية تصوير الزاجل كريات بيضاء والهجرة في الجسم الحي</em
Summary
هنا ، نحن تصف غير الغازية ثنائية الفوتون نهج المجهري (2P) لدراسة الكريات البيض صاروخ موجه في قاطع الطريق الماوس. نحن مناقشة الجوانب التقنية لدينا نسيج التحضير والتصوير والمشي القارئ من خلال تجربة نموذجية من الأولية التي أنشئت لتنفيذ وجمع البيانات.
Abstract
ثنائي الفوتون (2P) المجهري هو التصوير عالية الدقة التقنية التي تم تكييفها على نطاق واسع من قبل علماء الأحياء. قيمة المجهري 2P هو أنه يقدم معلومات غنية spatiotemporal بشأن السلوكيات داخل أنسجة الخلايا في فئران سليمة وحية. التوظيف الكريات البيض تلعب دورا هاما في الدفاع المضيف ضد العدوى وعندما لم يتم التحقق منه ، يمكن أن تسهم في الأمراض الالتهابية والمناعة الذاتية. دراسة الكريات البيض في الجسم الحي التوظيف يشكل تحديا تقنيا منذ خلايا تتحرك بسرعة داخل الأوعية تقع عميقا داخل أنسجة تشتت الضوء. حتى الآن ، ومعظم الدراسات التصوير intravital الجراحية تتطلب تحضيرا لفضح الأوعية الدموية والأنسجة. لتجنب تلف الأنسجة والالتهابات الناجمة عن الجراحة نفسها ، وهنا ، نحن تصف غير الغازية نهج التصوير وحيدة الخلية والتي يمكن استخدامها لدراسة الكريات البيض في الاتجار قاطع الطريق الماوس والسلاميات. نحن مناقشة الجوانب التقنية لدينا 2P التحضير والتصوير والمشي القارئ من خلال تجربة نموذجية من الأولية التي أنشئت لتنفيذ وجمع البيانات.
Protocol
Discussion
في هذا البروتوكول الفيديو نظهر إجراءات التصوير 2P غير الغازية من الكريات البيض في التوظيف استجابة للالتهاب.
وقاطع الطريق هو موقع الكلاسيكية الفسيولوجية لدراسة التهاب مثل مرض الحساسية ، والعدوى والمناعة الذاتية 4-7. 2P التصوي…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 – 3155-53502 واشنطن اتفاق بحوث الطبية الحيوية جامعة فايزر.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane, USP | Butler Animal Health Supply | 029405 | ||
| 655nm non-targeted quantum dots | Invitrogen | Q21021MP | ||
| Tetramathylrhodamine conjugated E. coli BioParticles |
Invitrogen | E2862 | ||
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | |||
| Quick gel | Duro | |||
| Puralube Vet Ointment | Pharmaderm Animal Health | |||
| Insulin syringes | BD | 08290-3284-38 | ||
| PBS | Thermo Scirntific | SH30256.02 |
References
- Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages. Blood. 96, 719-726 (2000).
- Zinselmeyer, B. H., Lynch, J. N., Zhang, X., Aoshi, T., Miller, M. J. Video-rate two-photon imaging of mouse footpad – a promising model for studying leukocyte recruitment dynamics during inflammation. Inflamm Res. 57, 93-96 (2008).
- Zinselmeyer, B. H., Dempster, J., Wokosin, D. L., Cannon, J. J., Pless, R., Parker, I., Miller, M. J. Chapter 16. Two-photon microscopy and multidimensional analysis of cell dynamics. Methods Enzymol. 461, 349-378 (2009).
- Gray, D. F., Jennings, P. A. Allergy in experimental mouse tuberculosis. Am Rev Tuberc. 72, 171-195 (1955).
- Lin, A., Loughman, J. A., Zinselmeyer, B. H., Miller, M. J., Caparon, M. G. Streptolysin S inhibits neutrophil recruitment during the early stages of Streptococcus pyogenes infection. Infect Immun. 77, 5190-5201 (2009).
- Smith, C. J., Zhang, Y., Koboldt, C. M., Muhammad, J., Zweifel, B. S., Shaffer, A., Talley, J. J., Masferrer, J. L., Seibert, K., Isakson, P. C. Pharmacological analysis of cyclooxygenase-1 in inflammation. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13313-13318 (1998).
- Wipke, B. T., Allen, P. M. Essential role of neutrophils in the initiation and progression of a murine model of rheumatoid arthritis. J Immunol. 167, 1601-1608 (2001).
- Baez, S. An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy. Microvasc Res. 5, 384-394 (1973).
- Mempel, T. R., Scimone, M. L., Mora, J. R., von Andrian, U. H. in vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues. Curr Opin Immunol. 16, 406-417 (2004).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 2604-2609 (2003).
