Summary

Трансуретральная Индукция Мышь инфекции мочевыводящих путей

Published: August 05, 2010
doi:

Summary

Это видео продемонстрирует методы transurethrally вызвать мыши инфекции мочевыводящих путей и количественной оценки степени в результате инфекции.

Abstract

Уропатогенных штаммов бактерий, представляющих интерес, выращенные на агаре. Как правило, уропатогенных<em> Е. палочки</em> (УПЭК), а также другие штаммы могут быть выращены на ночь на Лурия-Бертани (LB) агаре при 37 ° С в окружающем воздухе. УПЭК штаммы растут как желтовато-белые полупрозрачные колонии на LB агар. После подтверждения соответствующих морфологии колонии, отдельные колонии, затем взял быть культурным в бульоне. Л. Б. бульон может быть использован для большинства уропатогенных штаммов бактерий. Два последовательных, ночевка культур бульон LB может быть использован для повышения выражение типа я пили, четко определенных факторов вирулентности уропатогенных бактерий. Отвар культуры разбавляют до необходимой концентрации в фосфатном буферном растворе (PBS). От восьми до 12 недель старых самок мышей находятся под наркозом и изофлуран transurethrally инокулированных бактерий использованием полиэтиленовой трубы покрытые 30 шприцов колеи. Типичные инокулята, которая должна быть эмпирически определяется для каждого бактериального / мышь напряжение комбинации, 10<sup> 6</sup> До 10<sup> 8</sup> КОЕ на мышь в 10 до 50 мкл PBS. После желаемого инфекции периода (одного дня до нескольких недель), мочи и мочевого пузыря и обе почки собирают. Каждый орган фарш, размещенных в PBS, и гомогенизируют в синий гомогенизатор Bullet. Моча и тканей гомогенатах серийно разводили в PBS и культивировали на соответствующие агара. На следующий день, колониеобразующих единиц учитываются.

Protocol

I. Подготовка уретры Катетеры Для каждого мочевого пузыря и почек мыши для пробы, место 5-6 шарики из нержавеющей стали (мочевой пузырь, размером 1,6 мм или 0,9-2,0 мм смесь) или циркония бисером азота (почки, размер 0,5 мм) в одном криопробирку трубка, соответственно. Автоклав бусинка содер…

Discussion

Индукция мыши инфекции мочевыводящих путей с помощью трансуретральной инокуляции бактерий давние, но технически сложная процедура 11. Хунг и Hultgren недавно опубликовал прекрасный обзор трансуретральной техники мыши инфекции мочевыводящих путей 13. В этой статье мы попытаемс…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Авторы хотели бы поблагодарить Шелли Се и Дженнифер Payne для их экспертной технической помощи. Эта работа стала возможной благодаря грантам от общества детской урологии и исследований Стэнфордского детской фонд.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Cryovial tubes, 2.0 ml polypropylene (no caps)   E&K Scientific 640201  
Caps for cryovial tubes, with ‘O’ ring   E&K Scientific 440011-N  
Bullet Blender   Next Advance BBX24  
Zirconium Oxide Beads (0.5mm)   Next Advance ZROB05  
Stainless Steel Beads (1.6mm)   Next Advance SSB16  
Stainless Steel Bead Blend (0.9-2.0mm)   Next Advance SSB14B  
CBA/J Mice, 8-12 week old female   Jackson Laboratories 000656  
Phosphate Buffered Saline (NaCl 137mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM)   EMD EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4)  
LB agar        
LB broth   EMD 1.10285.0500  
Isoflurane (Aerrane)   Baxter NDC 10019-773-60  
Inoculating loops   Fisher Scientific 22-363-601  
Eosin-methylene blue (EMB) agar powder   Himedia Laboratories MM022-500G  
MacConkey agar powder   Difco 212123  
LB agar powder   Difco 244520  
Intramedic non-radiopaque polyethylene tubing, PE10 [inner dimension 0.28 mm (0.011 inch); outer dimension 0.61 mm (0.024 inch)]   BD Biosciences 427401  
30 gauge needles, 1/2 inch   BD Biosciences 305106  
1 ml tuberculin Slip-Tip syringe   BD Biosciences 309602  
3 ml Luer-Lock syringe   BD Biosciences 309585  

References

  1. Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice. Infect Immun. 55, 373-380 (1987).
  2. Rouschop, K. M. Urothelial CD44 facilitates Escherichia coli infection of the murine urinary tract. J Immunol. 177, 7225-7232 (2006).
  3. Malaviya, R., Ikeda, T., Abraham, S. N. Contribution of mast cells to bacterial clearance and their proliferation during experimental cystitis induced by type 1 fimbriated E. coli. Immunol LettM. 91, 103-111 (2004).
  4. Lane, M. C., Alteri, C. J., Smith, S. N., Mobley, H. L. Expression of flagella is coincident with uropathogenic Escherichia coli ascension to the upper urinary tract. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 16669-16674 (2007).
  5. Hvidberg, H. Development of a long-term ascending urinary tract infection mouse model for antibiotic treatment studies. Antimicrob Agents Chemother. 44, 156-163 (2000).
  6. Hopkins, W. J., Hall, J. A., Conway, B. P., Uehling, D. T. Induction of urinary tract infection by intraurethral inoculation with Escherichia coli: refining the murine model. J Infect Dis. 171, 462-465 (1995).
  7. Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains. Infect Immun. 66, 2798-2802 (1998).
  8. Gunther, N. W. t., Lockatell, V., Johnson, D. E., Mobley, H. L. In vivo dynamics of type 1 fimbria regulation in uropathogenic Escherichia coli during experimental urinary tract infection. Infect Immun. 69, 2838-2846 (2001).
  9. Bishop, B. L. Cyclic AMP-regulated exocytosis of Escherichia coli from infected bladder epithelial cells. Nat Med. 13, 625-630 (2007).
  10. Thumbikat, P., Waltenbaugh, C., Schaeffer, A. J., Klumpp, D. J. Antigen-specific responses accelerate bacterial clearance in the bladder. J Immunol. 176, 3080-3086 (2006).
  11. Hagberg, L. Ascending, unobstructed urinary tract infection in mice caused by pyelonephritogenic Escherichia coli of human origin. Infect Immun. 40, 273-283 (1983).
  12. Hopkins, W. J., Hall, J. A., Conway, B. P., Uehling, D. T. Induction of urinary tract infection by intraurethral inoculation with Escherichia coli: refining the murine model. J Infect Dis. 171, 462-465 (1995).
  13. Hung, C. S., Dodson, K. W., Hultgren, S. J. A murine model of urinary tract infection. Nat Protoc. 4, 1230-1243 (2009).

Play Video

Cite This Article
Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection. J. Vis. Exp. (42), e2070, doi:10.3791/2070 (2010).

View Video