Metástase experimental e CTL Adoptive Transferência Modelo rato Imunoterapia

Resumo

Uma metástase pulmonar experimental e modelo de rato CTL imunoterapia para a análise da interação de células tumorais de células-T In vivo.

Resumo

Modelo de camundongo experimental de metástase é um modelo simples e metástase ainda fisiologicamente relevantes. As células tumorais são injetadas por via intravenosa (iv) nas veias da cauda do rato e colonizar nos pulmões, assim, assemelhando-se os últimos passos de metástase de células tumorais espontânea: a sobrevivência na circulação extravasamento, e colonização nos órgãos distal. Do ponto de vista terapêutico, o modelo experimental de metástase é o modelo mais simples e ideal uma vez que o alvo das terapias é freqüentemente o ponto final de metástase: estabelecida tumor metastático no órgão distal. Neste modelo, as células tumorais são injetadas nas veias da cauda iv mouse e permitido para colonizar e crescer nos pulmões. Tumor-específico CTLs são injetados iv no mouse metástases de rolamento. O número eo tamanho das metástases de pulmão pode ser controlada pelo número de células tumorais para ser injetada eo tempo de crescimento do tumor. Portanto, vários estágios de metástase, metástase do mínimo para metástases extensas, pode ser modelada. Metástases pulmonares são analisados ​​pela inflação com tinta, permitindo fácil observação visual e quantificação.

Protocolo

1. Modelo Experimental rato Metástase

1. No dia antes da injeção das células tumorais, uma semente T75 frasco com até 1 x 10 ⁷ CMS4-Met células em 10 mL de meio RPMI contendo 10% de soro para obter rápido crescimento de células tumorais. Incubar durante a 37 ° C.
2. No dia da injeção, remova a mídia e lave as células uma vez com PBS, em seguida, colher as células tumorais com 0,05% de tripsina-EDTA a 37 ° C por 5 minutos. Parar a reação com 10 mL de meio RPMI contendo 10% de soro. Transferência de células para um tubo cônico.
3. Girar as células a 1300 rpm em uma centrífuga Sorvall RT Legend por 3 minutos em temperatura ambiente. Remo....

Materiais

Soluções:

Índia Solução de tinta (17):

1. Despeje 150 ml de água destilada para um balão de 250 ml.
2. Adicione 4 gotas de hidróxido de amônio à água destilada.
3. Adicionar 30 ml de tinta India estoque (ou seja, Sanford Black Magic Ink Drawing Waterproof 4465 item 44011) para a mistura de amônia e água.
4. Blusa com água destilada para um volume de 200 ml. Solução está pronta para a injecção.

Solução Fekete (17):

Fekete solução é usada para branquear nanquim-inflado portadores de tumor nos pulmões para distinguir nódulos tumorais branco do fundo preto do tecido normal.

1. Adicione 350 ml EtOH 95% a garrafa de vidro 1L.
2. Adicionar água destilada 150ml
3. Adicionar 50ml de formaldeído
4. Adicionar 25ml de ácido glacial ácido