我々は2日後fetilization(DPF)急性腎障害(AKI)を誘導するためにゼブラフィッシュの幼虫にアミノグリコシド、ゲンタマイシンを、マイクロインジェクションのテクニックを説明します。我々はまた、AKIの媒介の損傷を可視化するためにゼブラフィッシュ幼生の埋め込みプラスチックと切片全体のマウント免疫組織化学のための方法を、説明します。
このビデオの記事では、nephrotoxicantとしてゲンタマイシンを使用してAKIのゼブラフィッシュモデルを説明します。テクニックは、2 DPFのゼブラフィッシュでの静脈内microinjectionsで構成されています。この手法は、時間あたり15〜20魚の注入を可能に、ゼブラフィッシュ幼生の血流中に可溶性物質を提供する効率的で迅速な方法を表します。 AKIの研究に加えて、このマイクロインジェクション技術はまた、血管造影などの実験研究の他のタイプに使用することができます。我々は減少し、腎機能の視覚的な措置に必要な機器からの技術の詳細なプロトコルを提供しています。さらに、我々はまた、腎臓の尿細管マーカーで幼生ゼブラフィッシュの埋め込みプラスチックと切片を固定、全体のマウント免疫組織化学のプロセスを示しています。浮腫、近位尿細管上皮細胞における細胞極性の喪失、および尿細管の形態学的混乱:私たちは、ゲンタマイシンを注射したゼブラフィッシュの幼虫は、一貫性のあるAKIとの形態的特徴を示して実証する。
このビデオの記事では、ゼブラフィッシュ幼生におけるゲンタマイシンの媒介近位尿細管の損傷を作成することで、AKIのモデルのための静脈内マイクロインジェクション法を示した。心膜および/または総浮腫の形成にこの損傷は、その結果、水のバランスを調節することができないことを反映。我々はまた、細胞極性の喪失や損傷した腎臓の近位尿細管の混乱を示す、差別化された腎臓の尿細管を(マジュムダールら、2000)マーク抗体による免疫組織化学実験を説明した。静脈内microinjectionsは、ゼブラフィッシュ幼生の血流中に水溶性物質を提供するための効率的な方法を表しています。この手法は、様々な物質を導入するための優れたツールであり、蛍光マーカーのユニフォームの注射の助けを借りて、一貫性のある結果を可能にする、何度も繰り返すことができます。
The authors have nothing to disclose.
この作品は、衛生研究所(NIH)助成金R01DK069403とP30DK079307の米国の国民の協会によって資金を供給された。
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
α6F mouse monoclonal | Developmental study Hbridoma Bank | |||
Block Holder EBH-2 | Polysciences, Inc. | 15899 | ||
Borosilicate Glass Capillaries | World Precision Instruments, INC | TW100-6 | ||
Capillary tubes R-6 Custom Glass Tubing | Drummond Scientific Company, Broomall PA | 9-000-3000 | ||
Catalyst Powder | Polysciences, Inc. | 02618 | ||
Cy3 | Jackson Immunoresearch Laboratories, Inc. | 155-165-003 | ||
Dextran 10k Lucifer yellow, lysine fixable | Molecular probes | D1825 | ||
DMSO | Sigma | D8418 | ||
Eyelash | Ted Pella | 113 | ||
Gentamicin sulfate | Sigma-Aldrich | G8648 | ||
Glass vials 4ml | Weathon | 225012 | ||
Iron plate | Nariscige | IP | ||
JB-4 Embedding Solution A | Polysciences Inc. | 0226A | ||
JB-4 Embedding Solution B | Polysciences, Inc. | 0226B | ||
Joystick micromanipulator | Narishige | MN 151 | ||
Magnetic stand | Narishige | MN-151 | ||
Manual microsyringe pump | World Precision Instruments, Inc | |||
Microinjection apparatus | World Precision Instruments, Inc. | PV820 | ||
Micromanipulator | World Precision Instruments, Inc. | M3301R | ||
Microtome | Thermo Electro Corporation | Shandon Finesse | ||
Mineral oil, light | Fisher Chemicals | 0121-1 | ||
Pipette puller | Kopf | 720 | ||
Plastic molding cup tray | Polysciences, Inc. | 16643A | ||
Razor blade | WVR Scientific | 55411-050 | ||
Slide warmer | Lab line | |||
Stage micrometer | Wards | 94 W 9910 | ||
Tilting base | World Precision Instruments, Inc. | TB 1 | ||
Tricaine powder | Sigma | A-5040 | ||
Tween 20 | Sigma | P7949 | ||
Microscope | Leica | S6F | Dissecting microscope | |
Microscope | Leica | M205FA | Fluorescent microscope |