Allografting orthotopic תוך גולגולתי של תאים מדולובלסטומה ב עכברים immunocompromised
Summary
פרוטוקול זה מתאר את הבידוד דיסוציאציה של רקמת מדולובלסטומה העכבר, לאחר מכן allografting של תאים סרטניים לעכברים הנמען immunocompromised כדי ליזום מדולובלסטומה משנית.
Abstract
מדולובלסטומה הוא הגידול השכיח ביותר בילדים של מערכת העצבים. גוף גדול של מחקרים בבעלי חיים התמקדה cerebellar נוירון מבשרי גרגיר (CGNPs) בתור מקור התא של מדולובלסטומה עבור 1-4. עם זאת, מצגות קלינית מגוונת של תת מדולובלסטומה בחולים אנושיים (קשרי, desmoplastic, קלאסית גדול תא / אנפלסטית), ואת העובדה מדולובלסטומה נמצא משנה של חולים עם ביטוי לא אנושי חוץ רחמי של CGNP סמן 5, עולה כי מקורות תאית ומולקולרית של מדולובלסטומה מורכבים יותר רחוק מלהיות פוענחה לגמרי. לכן, זה הכרחי כדי לקבוע אם יש גידול מדולובלסטומה חלופה תא-of-מקור אשר מבוסס על תאים מסוג מודליות טיפולית ספציפית ניתן לפתח. לשם כך, תוך גולגולתי orthotopic allografting של מסומן גנטית סוגי תאים סרטניים ואחריו ניתוח בדיעבד של התפתחות גידולים משניים מקבלי יאפשר קביעת המקור התאי של גידולים ייזום תאים. כאן אנו מתארים את פרוטוקול הניסוי עבור orthotopic תוך גולגולתי allografting מדולובלסטומה של תאים שמקורם ברקמת הגידול הראשוני, ועל הליך זה יכול לשמש גם עבור השתלת תאים של שורות תאים הוקמה.
Protocol
Discussion
מספר גורמים קריטיים כדי להבטיח תא מדולובלסטומה מוצלח allografting כי התשואות היווצרות גידולים משניים הם כדלקמן: ראשית, להשתמש רק Accutase 50% רקמת ניתוק ואל יתר לעכל את הרקמה כטיפול אנזים ממושכת גורמת הפחתה משמעותית של כדאיות התא. כמו כן, להשתמש רק Pipetman גודל 1 מ"ל כמו טיפים קטנ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר זה נתמך על ידי תרומות של ונדרבילט Ingram-Cancer Center תמיכה גרנט (P30 CA068485), המוח ילדות קרן גידול לבין המכון הלאומי לבריאות (NS042205).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Neurobasal medium | Invitrogen | 21103049 | ||
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml | |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X | |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X | |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% | |
| Glutamine | Invitrogen | 25030081 | 2mM | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51730 | ||
| Foredom flexible shaft drill, hang-up style | Stoelting | 58650 | ||
| Large probe holder | Stoelting | 51633 | ||
| 10 μL syringe, 26 ga., bevel tip | Stoelting | 51105 | ||
| Drill bit .75mm | Stoelting | 51455-3 |
References
- Schuller, U. Acquisition of granule neuron precursor identity is a critical determinant of progenitor cell competence to form Shh-induced medulloblastoma. Cancer Cell. 14, 123-134 (2008).
- Yang, Z. J. Medulloblastoma can be initiated by deletion of Patched in lineage-restricted progenitors or stem cells. Cancer Cell. 14, 135-145 (2008).
- Kessler, J. D. N-myc alters the fate of preneoplastic cells in a mouse model of medulloblastoma. Genes Dev. 23, 157-170 (2009).
- Flora, A., Klisch, T. J., Schuster, G., Zoghbi, H. Y., Y, H. Deletion of Atoh1 disrupts Sonic Hedgehog signaling in the developing cerebellum and prevents medulloblastoma. Science. 326, 1424-1427 (2009).
- Salsano, E. Expression of the neurogenic basic helix-loop-helix transcription factor NEUROG1 identifies a subgroup of medulloblastomas not expressing ATOH1. Neuro Oncol. 9, 298-307 (2007).
