一个 EX - OVO鸡胚胎培养系统适用于成像和显微外科的应用
Summary
在这篇文章中，我们提出一个简单的方法，使长期<em> EX – OVO</em>禽流胚胎培养。这种技术是理想的纵向实验要求完整的光学辅助和/或无菌运输禽流胚胎。
Abstract
了解驱动器正常和畸形的胚胎发育的遗传和微环境因素之间的关系，为发现新的治疗策略的根本。成像技术的进步已使定量调查的组织和成熟的身体计划，但后一阶段的胚胎形态发生目前还不太清楚。鸡胚胎是一个有吸引力的脊椎动物为这个应用程序的模型系统，因为它的文化和手术操作方便。早期胚胎可以培养一个短的时间在滤纸上环，从而使光纤接入完整的细胞图案和命运的研究1,2。学习先进的，如心脏的形态发生发育过程中，传统上通过一个窗口蛋壳3-5，但这种技术限制了光纤接入，由于窗口大小。我们以前开发的一个简单的方法来文化的整个胚胎前，OVO六角权衡船最多至10天，这使得通过高分辨率成像超声6,7。这些文化，运输困难，限制了可用于现场实验的成像工具的类型。我们在座改善与成本效益，便携式环境室的无壳培养体系。鸡蛋被破解到圆周部分用无菌水填充到塑料杯贴上由聚氨酯膜（保鲜）创建了一个吊床。吊床的周长和深度尺寸均保持表面张力的关键，而下的吊床和水力学有助于抑制由运输引起的震动。还开发了一个小的足迹，循环水浴，使实验过程中连续的温度控制。我们证明至少14天的能力，在这样的文化胚胎的无形态发生缺陷或延迟，并聘请几个显微和成像应用这个系统。
Protocol
1， 前OVO文化协议： 孵育受精鸡蛋受精鸡蛋可以保存在13 ° C可高达5天前孵化没有启动发展。一个红酒柜可以保持这个温度。 孵育鸡蛋钝端，72小时连续摇动60％的恒温恒湿培养箱在37.5 ° C。 准备吊床（图1a） 填写¾ 9盎司塑料杯温暖的无菌水。一个普通的9安士杯有一个直径8厘米的顶部。我们发现，这个大小是最适合长时间的?…
Discussion
光纤接入和禽流胚胎实验是具有挑战性的，由于约束的鸡蛋壳。窗口大大限制了微血管注射和显微外科方法8访问人数。因此，只有早期胚胎可以被操纵，并连续观察是不可能的。使用培养皿的早期前 OVO文化的用途有限，因为控制不力，对胚胎的表面张力，防止长期文化9。最近，我们改进了这种技术，使用一个六角形的权衡船保持可接受的表面tenstion 7，但这些文化…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fertile white Leghorn chicken eggs | ||||
| Model GB1, Avery Incubators, Hugo CO | ||||
| Saran Wrap | ||||
| Kimwipes | Kimberly-Clark, Inc. | |||
| Rubber bands | ||||
| Warm sterile water | ||||
| 9 oz plastic cup | ||||
| 100 mm diameter Petri dish | ||||
| 1602N thermal air | GQF Manufacturing CO, Savannah GA | |||
| Fluorescein-conjugated dextran (2 MDa, 1% w/v in phosphate buffered saline) | Sigma Aldrich Inc. | |||
| Microforge | Glassworx, Inc, St Louis MO | |||
| Glass capillary tubes (0.75 mm ID) | ||||
| Micromanipulator | World Precision Instruments, Sarasota FL | Model M3301L | ||
| Fluorescent microscopy | Zeiss | Z20 | ||
| Fine 55-forceps | World Precision Instruments, Sarasota FL | |||
| 10-0 nylon surgical suture | Ethicon | |||
| Tubing | VWR | 1mm OD | ||
| 3 mL syringe | BD | |||
| 200 μL pipetter and pipette tips | VWR |
References
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Cite This Article
Yalcin, H. C., Shekhar, A., Rane, A. A., Butcher, J. T. An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications. J. Vis. Exp. (44), e2154, doi:10.3791/2154 (2010).