גדילה והתמיינות של מבוגרים בהיפוקמפוס סנאי הארקטי קרקע תאים גזע עצביים
Summary
בתאי גזע עצביים הוכנו מן ההיפוקמפוס של מבוגרים שאינם חורף סנאים בן שנה הארקטי הקרקע (AGS). תאים אלה גזע עצביים ניתן להרחיב באמצעות מעברים רבים, להיבדל ומתוך רצון להישמר כמו נוירון 50:50 כמעט לתרבות גליה.
Abstract
סנאים הארקטי הקרקע (Urocitellus parryii, AGS) הם ייחודיים ביכולתם שינה עם טמפרטורת הליבה גוף ליד או מתחת לאפס 1. בעלי חיים אלה גם להתנגד לפגיעה איסכמית למוח in vivo 2,3 ו בחמצן גלוקוז קיפוח במבחנה 4,5. אלו תכונות ייחודיות סיפק את הדחיפה כדי לבודד נוירונים AGS לבחון מאפיינים עצביים הטבועה זה יכול להסביר את היכולת של נוירונים AGS להתנגד פציעה ומוות התא הנגרם על ידי איסכמיה וטמפרטורות נמוכות מאוד. חלבונים או זיהוי מטרות הגן המאפשרים את המאפיינים הייחודיים של התאים האלה יכול לסייע לגילוי טיפולים יעילים במשך מספר אינדיקציות איסכמית לחקר סובלנות קר. ההיפוקמפוס למבוגרים AGS מכיל בתאי גזע עצביים אשר ממשיכים להתרבות, ומאפשר הרחבה קלה של אלה בתאי גזע בתרבות. אנו מתארים כאן השיטות שבהן חוקרים יכולים להשתמש אלה בתאי גזע נוירונים הבדיל עבור כל מספר של מטרות. על ידי ביצוע השלבים הבאים מקרוב התאים העצביים AGS גזע ניתן להרחיב באמצעות שני קטעים או יותר, ואז הבדיל לתרבות גבוהה TUJ1 חיובי נוירונים (~ 50%) ללא שימוש בכימיקלים רעילים כדי למזער את מספר התאים המתחלקים. איסכמיה גורמת neurogenesis 6 ו neurogenesis אשר ממשיך דרך ה-MEK / ERK מסלולים PI3K/Akt הישרדות איתות תורם התנגדות איסכמיה in vivo 7 ו במבחנה 8 (קלהר, אנדרסון, דרו et al., בהכנה). אפיון נוסף של תאים עצביים אלה ייחודיים יכולים לקדם בחזיתות רבות, תוך שימוש בחלק או בכל השיטות הללו.
Protocol
Discussion
AGS תאים בוגרים גזע עצביים הם חזקים והוא יכול להיות מורחבת קטעים רבים שהופך אותם מקור מצוין בתאי גזע עצביים ללימוד בסיסי של תכונות תא גזע עצביים. קצב ההתפשטות הוא בערך מוכפל כל עשרים וארבע שעות, אבל תאים אלה חייבים להיות passaged לפני מפגש לכת כי המגע בין תאים תעדיף בידול כ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי מחקר בארה"ב רפואי וציוד פיקוד הצבא להעניק # 05178001 ועל ידי NS041069-06 מן המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ. אנו מודים יואל Vonnahme על הערות מועילות על פרוטוקול.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| agsNSC | Lifeline | FC-0004 | ||
| agsNSC Expansion kit | Lifeline | LL-0008 | Alternative source for DMEM/F12, B27 and rhFGFb (www.invitrogen.com) | |
| agsNSC differentiation kit | Lifeline | LL-0009 | Alternative source for DMEM/F12 and ITS-x (www.invitrogen.com) | |
| NeuraLife maintenance media kit | Lifeline | LL-0012 | Alternative sources are NeuraBasal (LifeLine) or Neurobasal (in vitrogen), glutamine and B27 (www.invitrogen.com)Differentiated cells are maintained for up to 3 weeks in NeuroLife, but no more than 2 weeks in Neurobasal (www.invitrogen.com) | |
| Micrometer (such as a Bright Line Counting Chamber) | Hausser Scientific | 1490 | http://www.hausserscientific.com/hausserbrightlinedirect.htm | |
| Biocoat Poly-L-Lysine coated 96 well plates | BDBioscience | 356516 | www.bdbiosciences.com | |
| Large orifice pipette tips | Fisher Scientific | 02-707-141 | Avoids neuronal cell damage when pippetting. http://www.fishersci.com |
References
- Barnes, B. M. Freeze avoidance in a mammal: body temperatures below 0 degree C in an Arctic hibernator. Science. 244, 1593-1595 (1989).
- Dave, K. R., Prado, R., Raval, A. P., Drew, K. L., Perez-Pinzon, M. A. The Arctic ground squirrel brain is resistant to injury from cardiac arrest during euthermia. Stroke. 37, 1261-1265 (2006).
- Dave, K. R. Protein kinase C epsilon activation delays neuronal depolarization during cardiac arrest in the euthermic arctic ground squirrel. J Neurochem. 110, 1170-1179 (2009).
- Ross, A. P., Christian, S. L., Zhao, H. W., Drew, K. L. Persistent tolerance to oxygen and nutrient deprivation and N-methyl-D-aspartate in cultured hippocampal slices from hibernating Arctic ground squirrel. J Cereb Blood Flow Metab. 26, 1148-1156 (2006).
- Christian, S. L. Arctic ground squirrel (Spermophilus parryii) hippocampal neurons tolerate prolonged oxygen-glucose deprivation and maintain baseline ERK1/2 and JNK activation despite drastic ATP loss. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1307-1319 (2008).
- Jin, K. Evidence for stroke-induced neurogenesis in the human brain. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 13198-13202 (2006).
- Maysami, S., Lan, J. Q., Minami, M., Simon, R. P. Proliferating progenitor cells: a required cellular element for induction of ischemic tolerance in the brain. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1104-1113 (2008).
- Sung, S. M. Hypoxia/reoxygenation stimulates proliferation through PKC-dependent activation of ERK and Akt in mouse neural progenitor cells. Neurochem Res. 32, 1932-1939 (2007).
- Brewer, G. J. Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons. J Neurosci Methods. 71, 143-155 (1997).
- Palmer, T. D., Takahashi, J., Gage, F. H. The adult rat hippocampus contains primordial neural stem cells. Mol Cell Neurosci. 8, 389-404 (1997).
